中药肺纤Ⅲ号方及其拆方抗小鼠肺纤维化作用及其机制研究

摘要

目的:本课题旨在研究中药肺纤Ⅲ号方(人参多糖、川芎嗪、芒果苷)对抗博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的作用,并探讨其抗肺纤维化作用机制。　　方法:(1)建立肺纤维化模型及分组给药:小鼠每组10只,随机分为空白组、模型组、阳性组、中药肺纤Ⅲ号方组、中药肺纤Ⅲ号方组拆方分为活血补气组、活血清肺组、补气清肺组。采用对小鼠鼻腔一次性滴注博莱霉素(6mg.kg-1)建立肺纤维化动物模型。各组于造模14d后开始相应的药物干预,空白组和模型组采用生理盐水(NS)灌胃,阳性组给予地塞米松(1mg.kg-1.d-1)灌胃,其余各组每天分别给予中药肺纤Ⅲ号方、活血补气方、活血清肺方、补气清肺方灌胃。造模后第28d处死各组动物。　　(2)分别采用HE及Masson染色,观察肺组织病理切片,对肺泡炎症及肺纤维化程度分级;用碱水解法测定羟脯氨酸(HYP)的含量判断肺纤维化小鼠胶原变化的情况;ELISA法检测肺组织中白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、转化生长因子(TGF-β1)含量;实时荧光定量PCR检测肺组织TGF-β1mRNA表达水平;Western Blot法检测各组肺组织中Caspase-3蛋白表达。　　结果:(1)HE肺泡炎症分级显示,药物干预后各组组与模型组比较均有非常显著性差异(P<0.01)。Masson肺纤维化程度分级结果显示,干预14d后,各治疗组较模型组均有非常显著性差异(P<0.01)。　　(2)与模型组相比,中药肺纤Ⅲ号方与其拆方组较模型组 HYP含量显著性降低(P<0.01),各给药组与模型组比较均有显著性差异(P<0.01)。(3)与模型组比较,中药肺纤Ⅲ号方及其拆方能显著提高IFN-γ水平(P<0.05),显著降低小鼠肺组织中TNF-α、IL-4、TGF-β1的含量,与模型组对比具有显著性差异(P<0.01)。　　(4)与模型组相比,中药肺纤Ⅲ号方能显著降低肺组织中TGF-β1mRNA表达水平(P<0.01)。其他各给药组与模型组相比没有统计学意义(P>0.05)。(5)与模型组比较,各给药组均能显著提高凋亡因子 caspase-3蛋白水平(P<0.01)。提高炎症因子的凋亡率。在蛋白水平阶段,阳性药效果最好,中药肺纤Ⅲ号方和补气清肺方效果其次。　　结论:中药肺纤Ⅲ号方及其拆方可能通过以下三方面,减轻肺纤维化的形成:(1)降低羟脯氨酸HYP的含量,减少肺组织中胶原沉积,阻断肺纤维化的形成;(2)中药肺纤Ⅲ号方及其拆方通过提高 IFN-γ水平,降低小鼠肺组织中TNF-α、IL-4、TGF-β1的含量,抑制促炎症细胞因子的释放,发挥抗炎作用,减轻肺泡炎症,达到抗肺纤维化的作用;(3)中药肺纤Ⅲ号方能明显降低肺组织TGF-β1的活性,抑制TGF-β1 mRNA的表达水平,阻断肺纤维化的进程;(4)中药肺纤Ⅲ号方能促进炎症区域细胞凋亡,缓解肺泡炎症,促进肺泡结构修复。

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引言

1中药肺纤Ⅲ号方及其拆方对小鼠肺组织病理改变的影响

1.1实验材料

1.2方法

1.3 结果

1.4 小结

2肺组织HYP含量的测定

2.1实验材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 小结

3 中药肺纤Ⅲ号方及其拆方抗小鼠肺纤维化药效学研究

3.1 实验材料

3.2 方法

3.3 结果

3.4 小结

4中药肺纤Ⅲ号方及其拆方对抗小鼠肺纤维化机制研究

4.1 实验材料

4.2 实验方法

4.3 结果

4.4 小结

结论

参考文献

主要英文缩略词表

综述

致谢

个人简历及攻读学位期间获得的科研成果