当归挥发油对高血压模型大鼠血管内皮损伤的保护作用

摘要

目的：观察当归挥发油对左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）诱导的高血压模型大鼠血管内皮损伤的保护作用，并进一步研究探讨其调节机制。　　方法：SPF级雄性Wistar大鼠60只，均为10周龄，体质量(180±20) g，随机选取8只大鼠为正常对照组，其余50只大鼠用于实验造模，灌胃左旋硝基精氨酸甲(60 mg/kg.d)，连续5周建立高血压大鼠模型。造模成功后，将大鼠随机分为模型对照组、阳性药对照组（硝苯地平）、当归挥发油高、中、低剂量组，各组大鼠只数用n表示，其中n=8。给药各组大鼠灌胃相应剂量的药物，每日一次，连续8周，正常对照组、模型对照组则灌胃等容量的生理盐水。期间观察大鼠的生理状况（精神、活动，毛色及摄食饮水状态，测量体质量和大鼠尾动脉收缩压变化）；腹腔注射10％水合氯醛麻醉，腹主动脉联合心脏采血，摘取胸主动脉、腹主动脉；硝酸还原酶法检测血清一氧化氮（NO）含量、化学比色法测定血清一氧化氮合酶（NOS）含量、酶联免疫法（ELISA）测血清内皮素-1（ET-1）、血管假性血友病因子（vWF）、血栓调节蛋白（TM）水平；HE切片染色观察胸主动脉病理改变；扫描电镜观察胸主动脉超微结构的改变；流式细胞仪检测大鼠血液中循环内皮细胞数目；实时荧光定量PCR(qPCR)检测血管vWF、TM mRNA的相对表达量，免疫组化法、蛋白印迹法（Western blotting）检测血管钙网蛋白（CRT）定性及定量的结果。　　结果：1)正常组大鼠精神状态如常，随实验周数增加，大鼠体质量逐渐增加；模型组大鼠表现逐渐精神差，摄食饮水量下降，活动次数减少，毛质粗糙，色泽暗淡，体质量相比正常组大鼠明显减轻（P＜0.05）；阳性药组、高剂量组大鼠在连续给药2周后，精神恢复，摄食饮水量与正常组大鼠相近，体质量增长（P＜0.05）；中、低剂量组大鼠在连续给药6周体质量明显增长（P＜0.05）。2)与正常组相比，模型组大鼠收缩压明显升高（P＜0.05）；与模型组比较，当归挥发油高、中、低剂量组大鼠血压均有不同程度的下降，其中当归挥发油高剂量组大鼠收缩压在给药后4周开始快速下降，到8周后基本降至正常（P＜0.05），当归挥发油低剂量组降压作用最弱。3)与正常组比较，模型组大鼠血清ET-1升高，血清NO、NOS降低（P＜0.05）；与模型组比较，当归挥发油高、中、低剂量组大鼠血清ET-1下降、血清NO、NOS升高（P＜0.05）。4)与正常组比较，模型组大鼠血清TM、vWF升高（P＜0.05）；与模型组比较，当归挥发油高、中、低剂量组大鼠血清TM、vWF降低（P＜0.05）；5)正常组大鼠胸主动脉HE染色下表现：动脉内膜结构正常，无增厚，表面光滑，内皮连续完整无突起、缺损及细胞粘附；模型组大鼠动脉内膜增厚明显，管腔变窄，内膜结构紊乱，内皮凸起，缺损；阳性药组、当归挥发油高剂量组、当归挥发油中剂量组大鼠胸主动脉结构、厚度、内膜完整性均较模型组有不同程度改善，但当归挥发油低剂量组大鼠胸主动脉仍可见增厚的内膜，内皮结构不完整。6)正常组大鼠胸主动脉扫描电镜结果示：胸主动脉血管内皮结构完整，表面光滑，排列整齐，呈梭形排列，无细胞粘附及迁移；模型组大鼠胸主动脉扫描电镜结果示：胸主动脉血管内皮损伤严重伴有脱落，内皮下组织暴露，表面粗糙，结构紊乱并翻转，可见“虫蚀样”缺损，细胞粘附迁移明显；各给药组内皮结构完整性，内皮损伤有不同程度的改善，且阳性药组与高剂量组效果优于中剂量组，其血管内皮结构相对完整，而低剂量组血管仍可见内皮断裂、缺损及塌陷。7)与正常组比较，模型组大鼠外周血循环内皮细胞数明显增多（P＜0.05），提示：模型组内皮损伤严重；与模型组相比，阳性药组和当归挥发油高、中剂量组，循环内皮细胞数减少（P＜0.05）；8)与正常组比较，模型组TMmRNA和vWFmRNA相对表达量增加（P＜0.05），说明模型组大鼠血管内皮损伤明显；与模型组相比，阳性药组、高剂量组、中剂量组TMmRNA和vWFmRNA相对表达量下降（P＜0.05）；9)与正常组相比，模型组胸主动脉内膜中CRT黄色活性表达升高（图中箭头所示），与模型组比较，各给药组胸主动脉CRT黄色活性表达均有降低。10)与正常组比较，模型组大鼠腹主动脉CRT表达量增加（P<0.05）。与模型组比较，各给药组大鼠腹主动脉CRT蛋白表达量有不同程度下降的趋势（P<0.05）。与免疫组化法测定的结果呈一致。　　结论：当归挥发油能够降低一氧化氮合酶抑制剂诱导的高血压大鼠的血压，同时通过调节血清中NO、ET、vWF、TM水平以及血管内皮vWF、TM的表达，减少循环内皮细胞的数目，对高血压血管内皮损伤起到一定的保护作用；其保护内皮的潜在机制可能与通过拮抗Ca2+，减轻内质网应激，CRT在血管内皮中表达下调有关。

目录

声明

第一章 前言背景

1.1高血压病概述

1.2血管内皮结构与功能

1.3血管内皮损伤与高血压

1.4血管内皮损伤标志物

1.5高血压与血管内皮损伤的中医认识

1.6中药类对血管内皮损伤的保护作用

1.7 当归挥发油

第二章 实验部分

2.1实验材料

2.2左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)诱导高血压大鼠模型的制备

2.3实验内容与操作方法

2.4统计学处理

第三章 实验结果

3.1当归挥发油对高血压模型大鼠体质量影响

3.2连续给药前后各组大鼠收缩压值的变化

3.3当归挥发油对高血压模型大鼠血清一氧化氮（NO）、内皮素-1 （ET-1）、一氧化氮合酶（NOS）的影响

3.4当归挥发油对高血压模型大鼠血清血栓调节蛋白（TM）、血管假性血友病因子（vWF）的影响

3.5当归挥发油对各组大鼠胸主动脉HE染色的影响

3.6扫描电镜观察各组大鼠胸主动脉内皮结构的变化结果

3.7各组大鼠血液循环内皮细胞计数变化情况

3.8免疫组化观察各组大鼠胸主动脉钙网蛋白（CRT）的表达

3.9当归挥发油对大鼠腹主动脉TM mRNA、vWFmRNA相对表达量的影响

3.10当归挥发油对各组大鼠腹主动脉钙网蛋白（CRT）表达的影响

第四章 讨论与结论

第一部分

第二部分

结论

结语

参考文献

缩略词列表

在学期间的研究成果

致谢