抗幽门螺杆菌候选药物筛选及质量研究

摘要

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，HP）是导致胃炎、消化性溃疡、胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤及胃癌等疾病的元凶，世界卫生组织已将其列为Ⅰ类致胃癌因子。现有临床治疗HP药物存在副作用多、患者顺应性差、根除率逐年降低及耐药情况等，开发治疗HP更有效、安全的新药成为研究当务之急。本课题进行了抗幽门螺杆菌候选药物的筛选及质量研究，获得如下研究结果：　　1.筛选出了最佳抗幽门螺杆菌候选药物6-羟基己啉酮　　以标准菌株ATCC43504、ATCC700392、ATCC700824及临床分离菌株S-2为靶体菌，采用体外平板法，通过对13个候选化合物进行筛选，发现最佳候选药物为6-羟基己啉酮，活性接近临床首选药物阿莫西林。　　2.进行了6-羟基己啉酮理化性质的研究　　6-羟基己啉酮外观为白色粉末状固体，熔点高于300℃，略有引湿性，需要干燥保存，在20.4℃条件下，折光率范围是1.3438-1.3442，油水分配系数LgP≈3.38，不利于药物的吸收，可略溶于甲醇、乙醇中，微溶于乙腈、乙酸乙酯、三氯甲烷及DMSO中，极微溶解于水、石油醚，使用紫外分光光度计及HPLC对6-羟基己啉酮样品进行鉴别，与标准品一致。　　3.建立了HPLC检测6-羟基己啉酮有关物质的方法　　色谱条件：Welchrom Ultimate XP-Phenyl（4.6×250mm，5μm），检测波长237nm，流动相乙腈∶水（45∶55），柱温40℃，进样体积10μL，流速1mL/min，杂质A在2.563-41.007μg/mL范围内线性关系良好（R2=0.9992），回归方程为：y=28.719x-18.007；杂质B在2.578-41.251μg/mL范围内线性关系良好（R2=0.9995），回归方程为：y=50.2x-11.03；杂质C在2.528-40.450μg/mL范围内线性关系良好（R2=0.9996），回归方程为：y=51.11x-11.816；杂质D在2.505-40.080μg/mL范围内线性关系良好（R2=0.9994），回归方程为：y=48.528x-18.035，此方法专属性、精密度、准确度良好、方法可靠。确定6-羟基己啉酮的有关物质为杂质D，含量约为3.31%。　　4.建立了6-羟基己啉酮含量测定的HPLC方法　　色谱条件：Welchrom Ultimate XP-Phenyl（4.6×250mm，5μm），检测波长237nm，流动相乙腈：水（45:55），柱温40℃，进样浓度为0.1mg/mL，进样体积10μL，流速1mL/min，6-羟基己啉酮在0.063?1.003mg/mL范围内线性关系良好（R2=0.9997），回归方程为：y=57504x-521.08，此法专属性良好、精密度良好、准确度良好。6-羟基己啉酮样品的含量约为96.67%。　　5.建立了6-羟基己啉酮残留溶剂的GC方法。　　色谱条件：毛细管柱PX20（φ0.32mm×30m×1μm），起始柱温40℃维持5min，再以8℃/min的速度升至130℃，维持10min，载气为N2，流速3.5mL/min，进样口200℃，FID检测器250℃，分流比5:1，直接进样0.2μL，甲醇在30.120～0.048mg/mL范围内线性关系良好（R2=0.9988），回归方程为y=7524.8x-1026；乙醇在50.090～0.080mg/mL范围内线性关系良好（R2=0.9984），回归方程为：y=5180.6x-3004.7；乙酸乙酯在50.030～0.080mg/mL范围内线性关系良好（R2=0.996），回归方程为：y=9731.8x-8541；二氯甲烷在6.010～0.010mg/mL范围内线性关系良好（R2=0.9987），回归方程为：y=3077.1x+13.105；三氯甲烷在6.007～0.010mg/mL范围内线性关系良好（R2=0.9986），回归方程为：y=2529.7x+26.178；四氢呋喃在7.205～0.012mg/mL范围内线性关系良好（R2=0.9987），回归方程为：y=12505x+533.95，此方法专属性、重复性、准确度良好。6-羟基己啉酮样品均未检出甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃。　　6.完成了6-羟基己啉酮的检查　　氯化物检测结果均小于0.004%；硫酸盐检测结果均小于0.008%；砷盐检测结果均小于0.0001%；炽灼残渣测定结果均小于0.2%；重金属检测结果均小于0.001%；干燥失重量测定结果均小于0.5%。

目录

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英文缩写索引

1 绪论

1.1 引言

1.2 临床现有药物

1.2.1 抗生素类

1.2.2 质子泵抑制剂

1.2.3 铋剂

1.3 治疗幽门螺杆菌新方法

1.3.1 抗菌肽

1.3.2 联合益生菌治疗

1.3.3 疫苗

1.3.4 光动力灭活法

1.3.5 噬菌体疗法

1.4 本章小结

2 抗幽门螺杆菌候选药物筛选

2.1 材料与方法

2.1.1 实验材料

2.1.2 试验方法

2.2 结果与分析

2.2.1 供试菌株形态特征

2.2.2 生理生化特征

2.2.3 16SrDNA测序

2.2.4 候选药物抑菌作用

2.3 讨论

2.4 本章小结

3 理化性质及鉴别

3.1 实验材料

3.1.1 试药与试剂

3.1.2 实验仪器及设备

3.2 外观

3.2.1 实验方法

3.2.2 结果与分析

3.3 熔点

3.3.1 实验方法

3.3.2 结果与分析

3.4 溶解度

3.4.1 实验方法

3.4.2 结果与分析

3.5 引湿性

3.5.1 实验方法

3.5.2 结果与分析

3.6 折光率

3.6.1 实验方法

3.6.2 结果与分析

3.7 油水分配系数

3.7.1 实验方法

3.7.2 结果与分析

3.8 鉴别

3.8.1 实验方法

3.8.2 结果与分析

3.9 本章小结

4 有关物质

4.1 实验材料

4.1.1 试药与试剂

4.1.2 实验仪器及设备

4.2 杂质确定

4.3 方法

4.3.1 溶液的配制

4.3.2 色谱条件的建立

4.4 结果与分析

4.4.1 方法学考察

4.4.2 样品检测

4.5 本章小结

5 含量测定

5.1 实验材料

5.1.1 试药与试剂

5.1.2 实验仪器及设备

5.2 方法

5.2.1 溶液的配制

5.2.2 色谱条件

5.3 结果与分析

5.3.1 方法学考察

5.3.2 6-羟基己啉酮样品含量测定

5.4 本章小结

6 溶剂残留

6.1 实验材料

6.1.1 试药与试剂

6.1.2 实验仪器及设备

6.2 方法

6.2.1 溶液配制

6.2.2 气相色谱条件

6.3 结果与分析

6.3.1 系统适用性试验

6.3.2 方法学考察

6.3.3 6-羟基己啉酮样品检测

6.4 本章小结

7 一般项下检查

7.1 实验材料

7.1.1 试药与试剂

7.1.2 实验仪器及设备

7.2 氯化物

7.2.1 实验方法

7.2.2 结果与分析

7.3 硫酸盐

7.3.1 实验方法

7.3.2 结果与分析

7.4 砷盐检查法

7.4.1 实验方法

7.4.2 结果与分析

7.5 炽灼残渣

7.5.1 实验方法

7.5.2 结果与分析

7.6 重金属

7.6.1 实验方法

7.6.2 结果与分析

7.7 干燥失重

7.7.1 实验方法

7.7.2 结果与分析

7.8 本章小结

8 全文总结与展望

8.1 全文总结

8.2 展望

致谢

参考文献

个人简历、在学期间发表的学术论文及取得研究成果