重度子痫前期孕妇脐动脉血管平滑肌中经典瞬时受体电位通道6的表达

摘要

目的：妊娠期高血压疾病是妊娠期特有的一类常见且严重的疾病，以重度子痫前期最多见，常合并胎儿生长受限（fetal growth restriction，FGR），导致孕产妇与围产儿的不良结局。为探索孕妇脐动脉血管平滑肌细胞（human umbilical arterial smooth muscle cells，HUASMCs）中经典瞬时受体电位通道6（Transient Receptor Potential Canonical6，TRPC6）与重度子痫前期患者的关系，为发现妊娠期高血压疾病的新型治疗方法提供基础理论和依据。　　方法：（1）按照标准选取我院产科住院病人经阴道分娩或剖宫产分娩的10例正常组（Normal Patients，NP）与同期的10例患有重度子痫前期（Severe Preeclampsia，SPE）的孕妇相对照；15例早发型重度子痫前期（early-onset severe preeclampsia，ESPE）与同期的15例晚发型重度子痫前期（late-onset severe preeclampsia，LSPE）的孕妇相对照；10例重度子痫前期合并胎儿生长受限（severe preeclampsia with fetal growth restriction，SPEFGR）与同期的10例重度子痫前期未合并胎儿生长受限（severe preeclampsia no fetal growth restriction，SPENFGR组）的孕妇相对照。（2）采用实时荧光定量PCR（Real-time fluorescent quantitative PCR experiment,QPCR）与蛋白免疫印迹技术（Westernblotting）来进行检测。（3）QPCR：将所有样品提取的RNA逆转录为cDNA（complementary DNA,cDNA），将甘油醛磷酸脱氢酶（glyceraldehyde phosphate dehydrogenase,GAPDH）设为内参基因，进行QPCR，TRPC6与GAPDH的Ct值之差为ΔCt值，实验组与对照组的ΔCt之差为ΔΔCt，使用2-ΔΔCt值（即相对定量法来表示实验组与对照组的比值数）来表示实验组与对照组的TRPC6的mRNA的表达有无差异。（4）采用Western blotting技术成像对所得到的条带测定灰度值，TRPC6与GAPDH表达的蛋白的灰度值比值即为TRPC6蛋白的相对表达量。（5）结果采用均数±标准差（xˉ±s）来表示，运用SPSS17.0对结果进行检验，若符合正态分布则进行t检验，P＜0.05时差异有统计学意义。　　结果：（1）对比分析NP组与SPE组，QPCR结果：10例NP组HUASMCs的TRPC6的ΔCt为9.5833±0.9132，10例SPE组HUASMCs的TRPC6的ΔCt为8.4467±0.9817，差异有统计学意义（P=0.003＜0.05），通过计算2-ΔΔCt值为2.2955±0.6830。Western blotting结果：10例NP组的HUASMCs的TRPC6/GAPDH内参的灰度值比值为0.4823±0.0805，10例SPE组的HUASMCs的TRPC6/GAPDH内参的灰度值比值为0.8722±0.0789，差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）对比分析ESPE组与LSPE组，QPCR结果：15例ESPE组HUASMCs的TRPC6的ΔCt值为5.9180±0.3024，15例LSPE组HUASMCs的TRPC6的ΔCt值为7.2830±0.2733，差异具有统计学意义（P＜0.05），再通过计算得到2-ΔΔCt值为2.2964±1.1793；Western blotting结果：15例ESPE组HUASMCs的TRPC6与GAPDH的灰度值比值为0.9189±0.0495，15例LSPE组HUASMCs的TRPC6与GAPDH的灰度值比值为0.6956±0.0365，差异具有统计学意义（P＜0.05）。（3）对比SPEFGR组与SPENFGR组，QPCR结果：10例SPEFGR组HUASMCs的TRPC6的ΔCt为4.7702±0.5699，10例SPENFGR组HUASMCs的TRPC6的ΔCt为6.1758±0.5268，差异具有统计学意义（P＜0.05），通过计算2-ΔΔCt值为2.6991±0.7541；Western blotting结果：10例SPEFGR组的TRPC6/GAPDH的灰度值比值为0.9355±0.0612,10例SPENFGR组HUASMCs的TRPC6/GAPDH的灰度值比值为0.8110±0.0418，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　结论：（1）重度子痫前期孕妇脐动脉血管平滑肌中TRPC6通道mRNA及蛋白的表达水平均高于正常孕妇，提示了TRPC6的表达水平改变可能与重度子痫前期的发生发展有关；（2）早发型重度子痫前期孕妇脐动脉血管平滑肌中TRPC6通道mRNA及蛋白的表达水平均高于晚发型重度子痫前期孕妇，提示重度子痫前期发病时间的早晚可能与TRPC6表达的水平差异有关；（3）重度子痫前期合并胎儿生长受限孕妇脐动脉血管平滑肌中TRPC6通道mRNA及蛋白的表达水平均高于重度子痫前期未合并胎儿生长受限孕妇，提示胎儿生长受限的发生可能与TRPC6的表达上调有关。

目录

前言

1.妊娠期高血压疾病的基础及相关研究

2.TRP通道的特点及功能

3.妊娠期高血压疾病与TRPC6的相关性研究

4.本研究的目的与意义

材料与方法

1.研究对象及实验材料

1.1 研究对象

1.2 实验材料

2 主要试剂及耗材

2.1 主要实验试剂

2.2 主要实验溶液的配制

2.3主要实验耗材

3 主要实验仪器

4 实验方法

4.1 标本的采集、分离与冻存

4.2 实时荧光定量PCR实验

4.3 Western Blotting实验

结果

1.研究对象的基本资料情况

2.正常组与重度子痫前期组的结果的比较分析

2.1 QPCR结果

2.2 Western blotting结果

3.早发型重度子痫前期孕妇组与晚发型重度子痫前期孕妇组结果的比较分析

3.1 QPCR结果

3.2 Western blotting结果

2.重度子痫前期合并胎儿生长受限组与重度子痫前期未合并胎儿生长受限组结果的比较分析

4.1 QPCR结果

4.2 Western blotting结果

讨论

1 TRPC6通道在重度子痫前期中的表达及意义

2.早发型重度子痫前期中TRPC6的表达与意义

2.3 重度子痫前期合并胎儿生长受限孕妇中TRPC6的表达与意义

3 展望

结论

参考文献

中英文缩略词对照表

致谢

综述:经典瞬时受体电位通道6的表达及其研究进展

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