二肽基肽4激活ERK1/2/NF-KB信号通路诱导人主动脉血管平滑肌细胞钙化的研究

摘要

目的：探讨可溶性二肽基肽4(soluble Dipep-tidyl peptidase4，sDPP4)促进人主动脉平滑肌细胞(Human aortic smooth muscle cells，HASMCs)钙化的机制。　　方法：在这项研究中，我们通过茜素红及Von kossa染色探索了DPP-4对人血管平滑肌细胞(HVSMC)的钙化影响。随后，将人主动脉血管平滑肌细胞随机分为对照组（正常培养），阳性对照组（β-甘油磷酸），低浓度干预组(25ng/ml，DPP4)，高浓度干预组（200ng/ml，DPP4），高浓度+阳性对照组（DPP4+β-甘油磷酸），检测各组细胞钙化蛋白表达，最后再随机分为对照组（正常培养），干预组（200ng/ml，DPP4），JNK抑制剂组(SP600125)、P38抑制剂组(SB203580)、ERK1/2抑制剂组(PD98059)和NF-KB抑制剂组(BAY11-7082)后，Western-blot法检测各组细胞OPG，OPN，BMP2，RUNX2蛋白表达水平;最后通过检测ERK1/2和NF-KB磷酸化时间，得出相关通路的关系。　　结果：茜素红染色及及Von kossa染色结果显示，与正常对照组相比，DPP4干预组钙化结节明显增多，且与钙化组相当;且DPP4组OPG，OPN，RUNX2，BMP2蛋白表达水平成浓度，时间依赖性，DPP4干预下在15Min，500ng/ml时，P-ERK1/2表达明显增高(P＜0.05);抑制剂组与DPP4组与相比，抑制剂组OPG，OPN，RUNX2，BMP2表达均明显降低(P＜0.05)。sDPP4组较对照组钙化结节明显增多;ERK1/2抑制剂组(PD98059)和NF-KB抑制剂组(BAY11-7082)较阳性对照组的OPG(38.41％，18.41％)，OPN(41.81％，61.58％)，RUNX2(44.21％，59.4％)，BMP2(48.3％，52.19％)蛋白表达水平明显降低;400ng/ml sDPP4干预15min，P-ERK1/2表达明显增高(548.28％，372.55％);400ng/mlsDPP4干预60min，P-NF-κB表达明显增高(431.83％，207.63％);sDPP4处理60min时，sDPP4+ERK1/2组P-NF-κB明显降低(45.45％)，且N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine，NAC)组P-ERK1/2(0.03％)和P-NF-KB(48.15％)均下降。　　结论：DPP4促进人VSMC钙化的钙化，其可能的作用机制是激活了ERK1/2-NF-KB信号信号通路。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2．主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

5．实验分组

1．HASMCs的培养及鉴定

2．钙化HASMCs的形态学分析

3．DPP4对于HASMCs钙化的影响

4 不同浓度DPP4对于HASMCs钙化的影响

5 DPP4干预不同时间对于HASMCs钙化的影响

6．sDPP4对HASMC内活性氧(ROS)的影响

7．sDPP4诱导HASMC钙化与JNK，P38，ERK1/2，NF-KB信号通路的关系

8．sDPP4诱导HASMC钙化中ERK1/2，NF-KB，ROS的关系

9 相关钙化通路关系的探究

10．免疫荧光检查DPP4诱导SMC细胞表型的转换

讨论

1、糖尿病导致动脉中膜钙化的意义及影响

2．DPP4在糖尿病动脉中膜钙化中的作用

3．ERK/NF-Kβ信号通路的作用

4、DPP4调控ERK/NF-kβ信号通路的可能机制

结论

参考文献

英汉浓缩词对照表

致谢

二肽基肽4(DPP4)在血管疾病方面的价值和前景 综述

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