脑苷肌肽对大鼠脑出血后TNF-α,MMP-9,TIMP-1干预的实验性研究

摘要

目的：经过大鼠尾状核脑出血模型的建立，同时给予脑苷肌肽干预，观察脑苷肌肽对脑出血继发性脑损伤中炎性因子（TNF-α）、脑水肿相关因子(MMP-9、TIMP-1)的影响，探讨脑苷肌肽对脑出血后继发性脑损伤中炎症反应、脑水肿的影响及其保护作用。　　方法：⑴采用立体定位技术，将50ul大鼠自体鼠尾不凝血注射入大鼠脑尾状核，建立大鼠脑出血模型。⑵80只SD大鼠被随机分为四组:对照组、ICH组、小剂量治疗组、大剂量治疗组;对照组5只，ICH组及大、小剂量治疗组每组各25只;每组采取5个时间点观察:术后6h、24h、48h、72h和5d，每个时间点选用5只大鼠。⑶给药方式:向大鼠腹腔内注射脑苷肌肽，小剂量治疗组按3.15ml/Kg给药，大剂量治疗组按5.25ml/Kg给药，首次给药时间为术后2小时，之后每24小时1次，首次给药量加倍。对照组及ICH组同一时间点给予同等剂量生理盐水。⑷术后2h对脑出血模型进行评价，确定模型是否成功，在拟定的各个时间点对成功模型进行神经功能障碍评分。⑸运用免疫组化、图像分析技术来观察并量化TNF-α，MMP9，TIMP-1在各个时间点的变化情况。⑹HE染色观察脑组织血肿周围神经细胞，炎性细胞及脑组织变化情况。　　结果：①神经功能障碍:对照组无明显神经功能障碍(P＞0.05)，ICH组及治疗组与对照组相比，手术后2h时间点有明显神经功能障碍(P＜0.05);大小剂量治疗组和 ICH组相比，手术后2h及6h时间点神经功能障碍无明显差异(P＞0.05)，但二者神经功能障碍在24h、48h、72h以及5d时间点相比有明显差异(P＜0.05);大剂量与小剂量治疗组相比，神经功能障碍在24h、48h、72h以及5d时间点有明显差异(P＜0，05)，在6h时间点神经功能障碍无明显差异(P＞0.05)。②脑组织含水量:对照组脑组织含水量在各个时间点无明显差异(P＞0.05);ICH组脑组织含水量在术后6h、24h、5d与72小时时间点比较有明显差异(P＞0.05);ICH组和治疗组与对照组相比，脑组织含水量在各个时间点均有增加(P＜0.05);治疗组与ICH组相比，在24h、48h、72h及5d脑组织含水量有明显减少(P＜0.05);大剂量与小剂量治疗组相比，在24h、48h、72h及5d脑组织含水量有明显减少(P＜0.05)。③TNF-α表达数量:对照组TNF-α的数量有少量表达;ICH组TNF-α表达的数量在6h、24h、48h、5d与72h比较有统计学差异(P＜0.05);ICH、治疗组与对照组相比，TNF-α表数量在各个观察点有所增加(P＜0.05);治疗组与ICH组各个观察点相比，TNF-α表达数量有所减少(P＜0.05);大剂量与小剂量治疗组相比，各个观察点TNF-α表达数量有所减少(P＜0.05)。④MMP-9表达数量:ICH组及治疗组与对照组相比，MMP-9表达数量在各个观察点有明显差异(P＜0.05);ICH组MMP-9阳性表达数在6h、24h、72h、5d与48h相比，具有明显差异(P＜0.05);大小剂量治疗组与ICH组相比，MMP-9表达数量在各个观察点均有减少(P＜0.05);大剂量与小剂量治疗组相比，MMP-9表达数量在各个观察点均减少(P＜0.05)。⑤TIMP-1表达数量:ICH组与对照组相比，TIMP-1表达数量在各个观察点具有明显差异(P＜0.05);ICH组TIMP-1表达数量在6h、24h、48h、5d与72h相比，具有明显差异(P＜0.05);大小剂量治疗组与ICH组相比，TIMP-1表达数量在各个观察点有所增加(P＜0.05);大剂量与小剂量治疗组相比，TIMP-1表达数量在各个观察点有所增加(P＜0.05)。⑥HE染色:ICH组在术后各个观察点，可以看到血肿周围组织充血水肿明显，其中大量白细胞浸润，神经元变性坏死;随着术后时间点的延长，血肿周围组织中的胶质细胞显著增多，脑水肿在3d后开始减轻。治疗组与ICH组相比，细胞及组织充血水肿相对较轻，炎症细胞的浸润明显减少。大剂量与小剂量治疗组相比，脑水肿减轻更为明显。　　结论：⑴采用自体不凝血注入法制作大鼠模型方法简单，易操作。该脑出血模型与人体脑出血的病理生理变化较接近，为一种比较理想的研究脑出血的动物模型。⑵脑出血血肿周围组织中TNF-α、MMP-9明显增多，可能参与脑出血后脑水肿、炎症损伤。⑶脑出血后血肿周围组织TIMP-1明显升高，可能对脑出血后脑水肿及炎症反应有保护作用。⑷脑苷肌肽可能通过减少TNF-α、MMP-9表达以及白细胞浸润;增加TIMP-1的表达，从而对脑出血后脑水肿及炎症反应有保护作用。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 材料

2 主要药品和实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

结果

1 模型成功评价

2 神经功能障碍评分

3 术后脑组织含水量变化

4 术后各观察点TNF-α含量表达变化

5 术后各时间点MMP-9表达数量变化

6 术后各观察点TIMP-1表达变化

7 HE染色光镜观察结果

讨论

1 大鼠ICH模型的建立方法与评价

2 脑苷肌肽对脑出血后炎性细胞因子TNF-α的影响

3 脑苷肌肽对脑出血后脑水肿的影响

4 脑苷肌肽对脑出血后MMP-9的影响

5 脑苷肌肽对脑出血后TIMP-1的影响

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

MMP9，TIMP-1的生物学活性及其在脑出血中的作用研究 综述

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