双功能多肽GX1介导的阴离子脂质体转运腺病毒抑制胃癌血管内皮细胞的研究

摘要

目的:　　为胃癌治疗寻求一种靶向肿瘤血管的载药系统，以期提高药物的选择特异性，增强药物的治疗效果。本项目拟将既有靶向作用又有抑癌作用的靶向肽GX1，通过后插入法连接到载PTEN抑癌基因的腺病毒-阴离子脂质体(AL-Ad5)表面，考察其对胃腺癌细胞SGC-7901和共培养人脐静脉内皮细胞co-HUVEC的增殖抑制作用，对胃腺癌细胞SGC-7901的迁移抑制作用以及胃腺癌细胞SGC-7901对该拟构建载药系统GX1-AL-Ad5的摄取情况，为进一步证明它能在体内有效的抑制胃癌血管内皮细胞的增殖和迁移做基础工作。　　方法:　　1、对已导入抑癌基因PTEN的重组腺病毒进行扩增、纯化和滴度测定。　　2、通过简单的化学方法将GX1与PEG2000偶联，并且通过SDS-PAGE电泳和荧光强度的检测确认其是否偶联成功。　　3、合成胆固醇琥珀酸单酯以制备阴离子脂质体。　　4、通过钙离子融合法制备腺病毒-阴离子脂质体(Ad5-AL);通过后插入法将双功能多肽GX1连接到腺病毒-阴离子脂质体(Ad5-AL)表面，制备靶向载药系统(GX1-AL-Ad5)，并测定该复合物的粒径及Zeta电位。　　5、采用MTT法考察GX1-AL-Ad5对胃腺癌细胞SGC-7901的增殖抑制作用;采用Transwell实验考察GX1-AL-Ad5对胃腺癌细胞SGC-7901的迁移抑制作用;采用激光共聚焦显微镜检测胃腺癌细胞SGC-7901对GX1的摄取能力。　　结果:　　1、扩增、纯化后的腺病毒滴度为2.21×109pfu/mL。　　2、SDS-PAGE电泳检测结果显示GX1-PEG2000条带位置略低于10kd，PEG2000条带呈弥散分布于2-5kd处。通过荧光强度检测计算GX1-PEG2000平均连接率为75％。　　3、光谱检测显示成功合成胆固醇琥珀酸单酯，以用于制备阴离子脂质体。　　4、成功制备GX1介导的腺病毒-阴离子脂质体复合物(GX1-AL-Ad5)，并测得其粒径和Zeta电位均在较优范围内。　　5、GX1-AL-Ad5靶向给药系统对SGC-7901细胞和co-HUVEC细胞的平均增殖抑制率分别是68.36％和64.13％，均高于单独使用GX1-AL或Ad5-AL的平均增殖抑制率;GX1-AL-Ad5对胃腺癌细胞SGC-7901的迁移抑制作用明显高于GX1-AL和Ad5-AL;激光共聚焦的结果显示胃腺癌细胞SGC-7901对连接有GX1的载药系统摄取效果明显更好。　　结论:　　GX1能够介导腺病毒-阴离子脂质体携载抑癌基因PTEN靶向胃癌血管内皮细胞发挥肿瘤抑制作用。

目录

摘要

前言

第一章 靶向给药系统(GX1-AL-Ad5)的构建及表征

第一节 腺病毒的扩增和纯化

材料与方法

结果

讨论

第二节 多肽GX1的PEG修饰及确认

材料与方法

结果

讨论

第三节 胆固醇琥珀酸单酯的制备

材料与方法

结果

讨论

第四节 靶向给药系统(GX1-AL-Ad5)的制备及表征

材料与方法

结果

讨论

第二章 靶向给药系统(GX1-AL-Ad5)的体外药效研究

第一节 人胃腺癌细胞SGC-7901的培养

材料与方法

第二节 靶向给药系统(GX1-AL-Ad5)对SGC-7901细胞和co-HUVEC细胞的增殖抑制作用研究

材料与方法

结果

讨论

第三节 复合物(GX1-AL-Ad5)对胃腺癌细胞SGC-7901的迁移抑制作用的研究

材料与方法

结果

讨论

第四节 人胃腺癌细胞SGC-7901对靶向给药系统(GX1-AL-Ad5)摄取作用的研究

材料与方法

结果

讨论

全文小结

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

脂质体的制备与应用研究 综述

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