白黎芦醇上调人肺泡上皮细胞SIRT1表达抑制高氧诱导的细胞凋亡

摘要

目的:探讨去乙酰化酶1(SIRT1)氧化应激通路介导高氧诱导肺泡上皮细胞（HPAEpiC细胞）凋亡的作用，探讨其激动剂白藜芦醇(Res)对高氧诱导肺泡上皮细凋亡的保护作用。　　方法:将体外培养的人肺泡上皮细胞HPAEpiC株作为研究对象。首先采用MTT法找出最佳Res药物作用浓度，再将HPAEpiC细胞随机分为三组:对照组、高氧组、Res组。对照组:在含10％胎牛血清和1％青链霉素的DMEM高糖培养液中常规培养;高氧组:细胞第一次换上述培养液时后，通入3L/min的含95％氧气的高纯混合气，10～15min后置于50ml/LCO2培养箱密闭中培养;Res组:第一次换液时用终浓度为100μmol/L的等量SIRT1诱导剂Res培养，随后通入3L/min的含95％氧气的高纯混合气，10～15min后置于50ml/LCO2培养箱密闭中培养。培养24小时后检测以下指标:倒置相差显微镜下观察细胞形态学改变并照相;采用SP细胞免疫组织化学方法检测细胞内caspase-9/XIAP/SIRT1蛋白的表达，激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体内活性氧簇及其膜电位的变化，Western blot检测细胞SIRT1蛋白的表达，流式细胞术检测细胞凋亡率变化。　　结果:(1) MTT法提示，最佳Res药物浓度为100μmol/L。(2)倒置相差显微镜下，对照组细胞生长状态佳，贴壁率高，细胞活力好，呈扁平不规则多角形，圆形核位于细胞中央，约占1/3～1/2，细胞数量多、排列紧密、连接成片，悬浮细胞很少。高氧组细胞生长状态差，贴壁率低，细胞活力差，椭圆形或圆形细胞多，细胞间隙增大，连接松散，活细胞数量明显减少，悬浮细胞数量明显增多。Res组细胞生长状态、贴壁、细胞活力欠佳，活细胞细胞数量较高氧组有所增加、悬浮细胞数较高氧组减少，但未达对照组水平。与进口一次性塑料培养瓶比较，HPAEpiC细胞在国产玻璃培养瓶中生长状态佳，在一次性培养瓶中不能存活。(3)免疫组化结果显示:与对照组相比，高氧组24h后HPAEpiC细胞的caspase-9/XIAP/SIRT1表达差异均有统计学意义(P＜0.05);与高氧组相比，Res组24h后HPAEpiC细胞的caspase-9/XIAP/SIRT1表达差异均有统计学意义(P＜0.05)。(4)激光共聚焦显微镜结果显示:线粒体内活性氧显示红色荧光，细胞核显示蓝色荧光。对照组活性氧表达最低，高氧组活性氧表达最高，Res组介于两者之间，差异有统计学意义(P＜0.05)。(5)激光共聚焦显微镜结果显示:与对照组相比，高氧组细胞线粒体膜电位（△Ψm）明显下降，差异有统计学意义（P＜0.05）;与高氧组相比，Res组△Ψm有所升高，差异有统计学意义(P＜0.05)，但未达到对照组水平(P＜0.05)。(6) Western blot结果显示:与对照组相比，高氧组细胞SIRT1蛋白表达明显减少，差异有统计学意义(P＜0.05)，Res组与对照组相比，细胞内SIRT1蛋白表达明显增加，差异有统计学意义(P＜0.05)。(7)流式细胞术结果显示:高氧组与对照组相比，细胞凋亡率明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05);而Res组与高氧组相比，凋亡率有所下降，差异有统计学意义(P＜0.05)，但未达到对照组水平(P＜0.05)。　　结论:白藜芦醇(Res)通过上调去乙酰化酶1(SIRT1)在肺泡上皮细胞中的表达，减少细胞活性氧的产生从而维持细胞膜电位抑制肺泡上皮细胞凋亡，从而减轻高氧所致肺损伤。

目录

论文说明

摘要

前言

材料和方法

结果

附图

讨论

结论

参考文献

英文缩写及中英文对照

致谢

综述

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