Pendrin蛋白在哮喘小鼠气道的表达及地塞米松和吡格列酮对其影响的研究

摘要

目的:Pendrin蛋白是由PDS基因编码的阴离子交换转运体，主要功能是转运碘离子，氯离子，碳酸氢根等多种离子。研究发现pendrin蛋白在哮喘的发病机制中起着一定的作用，特别是和MUC5AC为主的气道粘液高分泌关系密切;而过氧化物酶增殖激活受体激动剂吡格列酮具有显著的免疫调节和广泛的抗炎作用。目前，地塞米松和吡格列酮在支气管哮喘中对气道pendrin蛋白表达的影响尚未见报道，因此本实验通过复制OVA哮喘小鼠模型，并使用地塞米松和吡格列酮进行干预，观察哮喘小鼠气道pendrin蛋白和MUC5AC的表达，探讨两种药物对pendrin蛋白表达的影响。　　方法:4-6周龄SPF级雌性Balb/c小鼠40只随机分为4组:PBS对照组、OVA哮喘组、吡格列酮治疗组和地塞米松治疗组。小鼠分别于第1天和第8天接受腹腔注射致敏，第22天至29天进行滴鼻激发。其中吡格列酮治疗组小鼠于每次激发前30min予吡格列酮灌胃治疗，地塞米松组小鼠于每次激发前30min予地塞米松腹腔注射治疗，对照组全程同步作PBS对照处理，末次激发24小时后处死全部小鼠收取标本。利用HE染色作肺组织切片病理学检查，支气管肺泡灌洗液(BAL F)中细胞瑞氏吉姆萨染色作分类计数，使用ELISA法检测血清中OVA特异性IgE和支气管肺泡灌洗液上清中IL-4和IL-13浓度，免疫组织化学染色法检测各组小鼠气道pendrin蛋白和MUC5AC表达情况，实时荧光定量PCR法检测肺组织中pendrin和MUC5AC的mRNA表达水平。　　结果:(1)HE染色结果:PBS对照组小鼠气道上皮细胞排列整齐，杯状细胞少，无明显炎症细胞浸润。OVA组小鼠肺部可见大量炎细胞浸润，上皮细胞坏死脱落，杯状细胞增生，气道内可见黏液栓;地塞米松及吡格列酮治疗后，浸润的炎症细胞明显减少，杯状细胞数量减少。(2) BAL F细胞分类计数:哮喘组小鼠BAL F中白细胞总数和嗜酸性粒细胞数均显著高于对照组（均P＜0.01），而地塞米松和吡格列酮干预组动物BAL F中的白细胞总数和嗜酸性粒细胞数量明显低于哮喘组（均P＜0.01）(3) OVA-sIgE水平:OVA组小鼠血清OVA-sIgE明显比对照组升高(P＜0.01)，而经地塞米松和吡格列酮干预的小鼠血清中OVA-sIgE比哮喘组显著降低（均P＜0.01）。(4) BAL F中IL-4和IL-13浓度:与PBS组相比，哮喘组小鼠BAL F内IL-4和IL-13明显升高(均P＜0.01)，地塞米松治疗后，IL-4和IL-13均降低（均P＜0.01），吡格列酮干预组IL-4和IL-13也显著低于OVA组（均P＜0.01），而高于地塞米松组（均P＜0.05）。(5)免疫组织化学显示:PBS组小鼠气道中可见少量pendrin和MUC5AC蛋白表达，OVA组小鼠气道均可见大量阳性染色细胞，明显多于PBS组，地塞米松组和吡格列酮组阳性染色均明显少于OVA组。(6)qPCR检测显示:OVA组小鼠肺组织中pendrin和MUC5AC的mRNA量明显比PBS对照组小鼠升高（均P＜0.01），而地塞米松和吡格列酮治疗后水平明显降低（均P＜0.01），地塞米松组较吡格列酮组水平更低(P＜0.01)。　　结论:(1) OVA诱导哮喘小鼠肺部pendrin和MUC5AC的蛋白及mRNA表达水平均同步升高，pendrin蛋白可能在哮喘小鼠气道黏液高分泌的病理生理变化过程中起重要作用。(2)地塞米松及吡格列酮均能抑制哮喘小鼠肺组织中炎症细胞的积聚和Th2型细胞因子的分泌，并能显著下调pendrin蛋白，同时伴随着MUC5AC蛋白的下调，抑制pendrin的表达可能是这两种药物减轻哮喘小鼠气道黏液高分泌的机制之一。

目录

摘要

前言

材料和方法

1 实验动物

2 主要实验试剂

3 主要溶液配制

4 主要实验仪器

5 实验方法

结果

1．OVA过敏性哮喘小鼠行为学观察

2．各组小鼠肺部病理学检查

3．哮喘动物肺泡灌洗液(BAL F)细胞分类计数

4．OVA哮喘小鼠血清中OVA．sIgE测定

5．支气管肺泡灌洗液(BALF)上清液中IL-4和IL-13浓度

6．小鼠气道pendrin蛋白免疫组织化学染色检测

7．qPCR法检测小鼠肺组织中pendrin含量

8．小鼠气道MUC5AC蛋白免疫组织化学染色检测

9．qPCR法检测小鼠肺组织中MUC5AC含量

附：图表

讨论

1．小鼠哮喘模型的复制

2．MUC5AC和Pendrin蛋白在哮喘小鼠肺组织的表达

3．地塞米松干预对哮喘小鼠气道pendrin和MUC5AC表达的影响

4．吡格列酮干预对哮喘小鼠气道pendrin和MUC5AC表达的影响

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

综述

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