尿石素A改善高糖致血管内皮损伤的作用与机制研究

摘要

目的：尿石素A是石榴、树莓、花生等食物经过肠道菌群消化产生的具有生物活性的多酚类物质，对多种疾病产生抗氧化、抗炎、诱导自噬等保护功效。本研究旨在探究尿石素A(Urolithin A, UA)对高糖所致的内皮细胞损伤的保护作用，研究其发挥保护作用的可能机制。　　方法：体外培养人脐静脉内皮细胞株，高糖(33.3mM葡萄糖)培养基模拟内皮细胞高糖损伤。CCK-8检测不同浓度尿石素A(0.1μM，1μM，10μM，50μM)对细胞增殖活力影响，确定最适干预浓度。RT-PCR检测细胞内皮素(Endothelin-1, ET-1)、内皮型一氧化氮合酶(Endothelial Nitric Oxide Synthase, eNOS)和腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)mRNA表达量。后续研究分为①正常组(5.5mM葡萄糖)、②高糖组(33.3mM葡萄糖)、③高糖+UA处理组、④高糖+UA+CompoundC处理组。生化试剂盒检测细胞的一氧化氮(NO)分泌量，Elisa试剂盒检测内皮细胞ET-1释放量，以确定尿石素A对内皮细胞功能的影响。通过DHE荧光探针染色和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)活性分析细胞氧化应激水平。采用PCR和Westernblotting检测eNOS、AMPK的表达及蛋白磷酸化水平。　　结果：与正常浓度葡萄糖比较，高糖培养明显降低了细胞存活(P＜0.05)，尿石素A(1μM-10μM)呈剂量依赖性提高内皮细胞的存活，10μM和50μM组无明显差异,后续实验干预浓度取10μM。尿石素A干预后可明显改善高糖损伤，内皮细胞ET-1在mRNA水平表达量降低，SOD活性升高(P＜0.05)，活性氧簇((Reactiveoxygenspecies,ROS)水平降低(P＜0.05)；NO释放增多和ET-1分泌减少(P＜0.05)；尿石素A可明显上调AMPK和eNOS磷酸化水平(P＜0.05)，对其表达总量无明显影响，而在AMPK抑制剂CompoundC处理后尿石素A对内皮细胞的上述作用被逆转。　　结论：一定浓度的尿石素A可以增加高糖环境下内皮细胞的存活，通过激活AMPK/eNOS通路，抑制高糖介导的血管内皮氧化应激水平，维持NO/ET-1分泌的动态平衡改善内皮功能障碍，发挥保护作用。

目录

声明

第1章 绪论

1.1 糖尿病与内皮细胞损伤

1.2 氧化应激

1.3 AMPK

1.4 尿石素A

1.5 课题研究目的及主要内容

1.5.1 创新性

1.5.2 研究目的

1.5.3 研究内容

第2章 尿石素A改善高糖致血管内皮损伤作用与机制研究

2.1.1 实验对象

2.1.2 实验试剂

2.1.3 主要实验仪器

2.2 实验方法

2.2.1 细胞培养

2.2.2 CCK-8检测细胞存活

2.2.3 实时定量PCR

2.2.4 细胞上清NO水平检测

2.2.5 Elisa检测细胞上清ET-1水平

2.2.6 DHE染色检测ROS生成

2.2.7 SOD活性检测

2.2.8 蛋白免疫印迹

2.2.9 统计学方法

2.3 结果

2.3.1尿石素A对高糖诱导条件下内皮细胞存活的影响

2.3.2 尿石素A对内皮细胞ET-1表达量的影响

2.3.3 尿石素A对内皮细胞功能分泌NO和ET-1的影响

2.3.4 尿石素A对高糖诱导血管内皮细胞氧化应激的影响

2.3.5 尿石素A激活高糖环境下内皮细胞AMPK/eNOS通路

2.4讨论

结论

致谢

参考文献

英文缩写词表

英文缩写词表（续）

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