模拟急性高原缺氧对小鼠一氧化氮相关通路的影响

摘要

目的：探讨急性高原缺氧对小鼠一氧化氮(Nitric Oxide，NO)相关通路的影响，并观察补充L-精氨酸对NO含量的影响。　　方法：将小鼠随机分为4组：常氧对照组、缺氧对照组、低剂量(300mg/kg)L-精氨酸组和高剂量(800mg/kg)L-精氨酸组。连续十天于同一时间点按照体重灌胃给药。其中，前三天于正常环境中给药，常氧对照组和缺氧对照组给以生理盐水。随后，将缺氧对照组、低/高剂量精氨酸组小鼠置于模拟海拔4000m高原环境的低压低氧动物实验舱中饲养一周。分别于打开、关闭低压低氧舱后和压力稳定后观察各组小鼠一般情况。以HE染色法观察肺组织形态结构改变；利用硝酸还原酶法检测肺组织NO含量；采用ELISA法检测不对称二甲基精氨酸(Asymmetric Dimethylarginine，ADMA)、内皮型一氧化氮合酶(Endothelial Nitric Oxide Synthase，eNOS)和精氨酸酶(Arginase， ARG)浓度。　　结果：缺氧对照组和低/高剂量精氨酸组小鼠肺组织形态结构发生改变。缺氧组肺泡结构不完整，肺泡间隔增宽，支气管腔内有少量渗出物，炎性细胞浸润。低/高剂量精氨酸组肺泡结构较完整，可见少量炎性细胞浸润。常氧组小鼠体重增加，而低氧暴露后，缺氧组、低/高剂量精氨酸组小鼠体重减轻。缺氧组和精氨酸组小鼠肺组织中eNOS含量增加。缺氧组NO含量高于常氧组和低/高剂量精氨酸组，但是差异无统计学意义。缺氧组、低/高剂量精氨酸组ADMA浓度较常氧组显著增加，精氨酸组小鼠ADMA浓度低于缺氧组。缺氧组ARGI含量高于常氧组，精氨酸组ARGI含量低于缺氧组。精氨酸组ARGI/eNOS比值低于缺氧组，低剂量和高剂量精氨酸组差异有统计学意义。　　结论：在模拟高原缺氧环境中，小鼠饮食饮水减少，活动量明显下降，对外界刺激反应迟钝，体重减轻。急性高原缺氧刺激使小鼠肺组织的形态结构呈现病理改变，肺泡结构不完整，肺泡间隔增宽，出现炎性细胞浸润和少量渗出物。其还导致NO相关通路失衡，影响NO的生成，可能机制与L-精氨酸的生物利用度改变有关，包括ADMA对eNOS的竞争性抑制作用和eNOS与ARGI之间的相互竞争。补充精氨酸可以相对增加缺氧小鼠的体重，但是其对缺氧引起的肺组织损伤和NO含量的作用有限。

目录

声明

第1 章绪论

1.1 高原医学研究的意义

1.2 NO相关通路的研究现状

1.2.1 NO的作用

1.2.2 NO的生物合成

1.2.3 ADMA对NO合成的影响

1.2.4 ARG对NO合成的影响

1.3 研究内容及拟解决的关键问题

1.3.1 研究内容

1.3.2 拟解决的关键问题

第2 章材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 实验动物

2.1.2 实验试剂

2.1.3 仪器及设备

2.2 实验方法

2.2.1 动物造模

2.2.2 小鼠一般情况观察

2.2.3 样本采集

2.2.4 肺组织形态结构观察

2.2.5 组织匀浆中蛋白浓度测定

2.2.6 肺组织中NO含量测定

2.2.7 ADMA浓度测定

2.2.8 eNOS、ARG I浓度测定

2.3 统计学方法

第3 章实验结果

3.1 小鼠的一般情况

3.2 小鼠肺组织形态结构改变

3.3 小鼠肺组织中ADMA、NO、eNOS和ARG I的变化

3.4 小鼠肺组织中ARG I与eNOS比值的比较

第4 章讨论

4.1 高原缺氧对小鼠一般情况的影响

4.2 高原缺氧对小鼠肺组织形态结构的影响

4.3 高原缺氧对小鼠NO相关通路的影响

4.4 研究局限性和前景

结论

致谢

参考文献

附录

攻读硕士学位期间发表的论文及科研成果