声明
摘要
符号说明
第一部分前言
第二部分 ARDS患者促炎症消退介质脂氧素A4的表达研究
2．1研究背景
2．2材料和方法
2．2．1主要试剂和仪器设备
2．2．2ARDS病例纳入及排除标准
2．2．3超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS)
2．2．4外周血样本中白细胞RNA的提取及荧光定量PCR
2．3统计学分析
2．4结果
2．4．1病例一般情况小结
2．4．2ARDS患者体内LXA4浓度明显低于健康志愿者
2．4．3ARDS患者外周血白细胞上LXA4受体(ALX受体)mRNA表达明显下调
2．4．4ARDS患者外周血白细胞中5-LOX、15-LOX-1 mRNA表达均明显下降
2．5讨论
2．6结论
第三部分 脂氧素A4影响ARDS患者外周血中性粒细胞的功能
3．1研究背景
3．2材料和方法
3．2．1主要试剂和仪器设备
3．2．2分离人外周血中性粒细胞
3．2．3瑞氏染色法鉴定中性粒细胞的形态和纯度
3．2．4CCK-8实验
3．2．5体外诱导中性粒细胞形成NETs
3．2．6实验分组
3．2．7活性氧(ROS)检测
3．2．8中性粒细胞吞噬功能的检测
3．2．9流式细胞仪检测中性粒细胞凋亡细胞率和NETosis死亡细胞率
3．3统计学分析
3．4实验结果
3．4．1瑞氏染色法鉴定中性粒细胞的形态和纯度
3．4．2 100nM LXA4是刺激外周血中性粒细胞的最佳有效浓度
3．4．3LXA4促进ARDS患者外周血中性粒细胞体外诱导NETs的生成
3．4．4LXA4抑制ARDS患者外周血中性粒细胞活性氧(ROS)的生成
3．4．5LXA4增强ARDS患者外周血中性粒细胞的吞噬能力
3．4．6LXA4能有效促进ARDS患者外周血中性粒细胞的凋亡，并减少NETosis引起的细胞死亡
3．5讨论
3．6结论
第四部分 脂氧素A4通过影响对中性粒细胞的功能对ARDS大鼠模型起保护作用及机制研究
4．1研究背景
4．2．2ARDS大鼠模型的建立
4．2．3实验分组与处理
4．2．4建立中性粒细胞缺乏性ARDS大鼠模型
4．2．5肺组织病理学检查
4．2．6酶联免疫法(ELISA)方法检测肺组织匀浆中TNF-α和IL-1β的含量
4．2．7分选型流式细胞仪分选大鼠外周血中性粒细胞
4．2．8体外诱导大鼠外周血中性粒细胞形成NETs
4．2．9中性粒细胞和NETs的免疫荧光染色
4．2．10中性细胞粒细胞弹性蛋白酶(NE)和髓过氧化物酶(MPO)免疫印迹(western blot)
4．2．11流式细胞技术检测中性粒细胞凋亡细胞率和NETosis死亡细胞率
4．3统计学分析
4．4实验结果
4．4．1LXA4对LPS诱导的ARDS大鼠有肺保护作用
4．4．2分选型流式细胞仪分选出大鼠外周血中性粒细胞
4．4．3LXA4通过与ALX受体结合促进ARDS大鼠外周血中性粒细胞NETs的
4．4．4LXA4促进中性粒细胞NE和MPO的释放
4．4．5LXA4通过促进中性粒细胞NE和MPO的释放增加NETs的产生
4．4．6LXA4对ARDS大鼠中性粒细胞凋亡和NETosis的影响
4．4．7LXA4对中性粒细胞缺乏的ARDS大鼠模型无保护作用
4．5讨论
4．6结论
5．1全文总结
5．2创新点
5．3不足之处
5．4前景与展望
参考文献
致谢
攻读博士学位期间发表的学术论文和参与的课题
学位论文评阅及答辩情况表
综述
英文论文Ⅰ
英文论文Ⅱ
山东大学;
