论文说明
声明
摘要
符号说明
第1章文献综述
1．1内源性反转录病毒的简述
1．1．1内源性反转录病毒基因组的结构
1．1．2内源性反转录病毒与天然免疫
1．2胶原样结构巨噬细胞受体Marco的研究进展
1．2．1Marco的结构与功能
1．2．2Marco与病毒
1．3巨噬细胞极化的简述
1．3．1巨噬细胞极化的分型、功能与调控其的分子机制
1．3．2巨噬细胞极化与病毒感染
1．4研究目的与意义
第2章鸡内源性反转录病毒ALVEl敲除对巨噬细胞基因表达谱的影响
前言
2．1材料
2．1．1细胞系
2．1．2主要试剂
2．1．3主要仪器
2．1．4主要试剂的配制
2．2实验方法
2．2．1转录组测序样品准备
2．2．2转录组测序结果分析
2．2．3转录组测序结果验证
2．3结果与分析
2．3．1RNA-seq相关性
2．3．2差异表达基因筛选
2．3．3差异表达基因聚类分析
2．3．4差异基因GO富集分析
2．3．5差异基因KEGG通路富集分析
2．3．6炎症反应相关基因GSEA分析
2．3．7差异基因RT-qPCR验证
2．4讨论
2．5小结
第3章env序列与Marco之间存在正向调控关系
前言
3．1材料
3．1．1细胞系及质粒载体
3．1．2主要试剂
3．1．3主要仪器
3．1．4主要试剂的配制
3．2实验方法
3．2．1env过表达载体pcDNA3．1-env1／2-ALVE1的构建
3．2．2ALVE1 env干扰序列合成
3．2．3HD11细胞瞬时转染
3．2．4env序列过表达和干扰后检测env和Marco转录水平变化
3．2．5慢病毒质粒构建
3．2．6慢病毒的包装
3．2．7慢病毒感染HDll细胞后通过嘌呤霉素药筛获得阳性过表达细胞
3．2．8Marco过表达载体pcDNA3．1-Marco的构建
3．2．9Marco基因敲除细胞系的建立
3．2．10Marco过表达和敲除后env和Marco转录水平变化的检测
3．2．11统计分析
3．3结果与分析
3．3．1成功构建本文所需载体
3．3．2收获pLV-env1-ALVE1和pLV-env2-ALVE1慢病毒
3．3．3成功构建env1和env2序列稳定表达的HD11细胞系
3．3．4gRNA靶点效率检测结果
3．3．5成功构建Marco基因去表达的HD11细胞系
3．3．6env序列与Marco之间存在正向调控关系
3．4讨论
3．5小结
第4章env序列通过Marco基因介导巨噬细胞产生抗病毒天然免疫作用
前言
4．1材料
4．1．1细胞、质粒、病毒和抗体
4．1．2主要试剂
4．1．3主要仪器
4．2实验方法
4．2．1细胞转染
4．2．3提取总RNA、逆转录和荧光定量PCR
4．2．4提取总蛋白及Western blot
4．2．5统计分析
4．3结果与分析
4．3．1ALV-Jenv基因过表达抑制Marco转录
4．3．2过表达Marco抑制ALV-J复制
4．3．3过表达Marco诱导病毒dsRNA识别受体基因转录
4．3．4过表达Marco诱导抗病毒天然免疫基因转录
4．4讨论
4．5小结
全文总结
创新性
研究展望
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
扬州大学;
