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摘要
缩略符号说明
前言
1．2生活史
1．3引起的作物疫病
2疫霉菌与植物互作
2．1植物免疫系统
2．2疫霉菌效应蛋白
3核调控蛋白
3．1发现过程
3．2分类和核转运机制
3．3生物学功能
3．4卵菌中的类核调控蛋白
1供试菌株和植物材料
2主要质粒载体
3核酸的提取
3．1植物基因组DNA的提取
3．2疫霉菌基因组DNA的提取
3．3植物或疫霉菌总RNA的提取
3．5质粒DNA的提取
4载体构建
4．1常规载体构建
4．2HDR载体构建
4．3sgRNA载体构建
5细菌和酵母感受态的制备与转化
5．1大肠杆菌DH5α
5．2农杆菌GV3101
5．3酵母菌株YTK12
6农杆菌介导的基因瞬时表达
7本氏烟叶片接种
8蛋白操作
8．1蛋白的提取
8．2蛋白电泳和检测
9辣椒疫霉的基因敲除
9．1原生质体的转化
9．2转化子的筛选与纯化
9．3转化子的致病力分析
10互作蛋白的筛选
10．1酵母融合法筛选文库
10．2酵母质粒的测序
11蛋白互作验证
11．1酵母双杂交
11．2双分子荧光互补
12亚细胞定位观察
13酵母蔗糖酶外泌实验
13．1对二糖利用能力鉴定
13．2TTC显色鉴定
14数据统计分析
结果与分析
1Pcsep48基因的克隆和蛋白序列分析
2PcSEP48的定位分析
2．1PcSEP48具有功能性的信号肽
2．2PcSEP48定位于植物的细胞核
3Pcsep48的敲除导致辣椒疫霉致病力下降
3．1sgRNA载体的构建
3．2基因替换载体的构建
3．3基因敲除转化子的筛选
3．4基因敲除削弱辣椒疫霉对寄主的致病力
4PcSEP48过表达诱导植物产生抗病性
5PcSEP48与本氏烟KLCR3互作
5．1PcSEP48互作蛋白的筛选
5．2PcSEP48和本氏烟KLCR3互作
讨论
参考文献
附录
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
扬州大学;
