声明
摘要
第一章猪繁殖与呼吸综合征病毒与宿主抗病毒先天性免疫研究进展
1PRRSV基因组结构及编码蛋白
1．1基因组结构
1．2主要的非结构蛋白
1．3主要的结构蛋白
2PRRSV感染与复制
2．1细胞受体
2．2PRRSV复制过程
3PRRSV与抗病毒先天免疫应答
3．2PRRSV感染与Ⅰ型干扰素应答
3．3拮抗Ⅰ型干扰素应答的PRRSV蛋白
4宿主蛋白ZAP抗病毒功能研究进展
4．2ZAP的抗病毒机制
4．3ZAP的抗病毒功能调节
5PRRSV疫苗
5．1弱毒活疫苗
5．2灭活疫苗
5．3新型疫苗
6IL-7在疫苗中的应用
7结语
参考文献
第二章过表达MAVS的Marc-145细胞转录组分析
1材料与方法
1．1细胞、病毒与主要试剂
1．2病毒接种
1．3启动子活性检测
1．4过表达MAVS的Marc-145细胞转录组分析
1．5cDNA的合成
1．6荧光定量PCR
1．7Western-blotting
2结果
2．1过表达MAVS能够介导强力的抗PRRSV免疫应答
2．2测序样品质量检测
2．3MAVS诱导的差异表达基因统计与验证
2．4差异表达基因功能分析
2．5主要的差异表达基因
2．6差异表达基因相互作甩分析
3讨论
参考文献
第三章ZAP抑制PRRSV的复制并与病毒Nsp9互作
1材料与方法
1．1细胞、病毒与主要试剂
1．2质粒构建及转染
1．3干扰素处理
1．4病毒接种与毒价测定
1．5细胞活性测定
1．6RNA干扰
1．7荧光定量PCR
1．8Western-blotting
1．9间接免疫荧光(IFA)
1．10病毒吸附及侵入检测
1．11病毒生长动态测定
1．13共聚焦显微镜检测
1．14数据统计
2结果
2．1候选抗病毒分子对PRRSV复制的影响
2．2ZAP是一种干扰素诱导基因
2．3过表达ZAP抑制PRRSV复制
2．4敲减ZAP的表达促进PRRSV复制
2．5ZAP不影响PRRSV的吸附与侵入过程
2．6ZAP在PRRSV复制早期就开始发挥抗病毒作用
2．7ZAP与PPRSV-Nsp9互作
2．8ZAP的锌指结构域是其抗PRRSV及与Nsp9互作的关键结构域
2．9Nsp9的150-160位氨基酸是其与ZAP互作的关键区域
3讨论
参考文献
第四章猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp4拮抗ZAP蛋白的抗病毒活性
1材料与方法
1．1细胞、病毒与主要试剂
1．2质粒构建及转染
1．3荧光定量PCR
1．4病毒接种和毒价测定
1．5Western blotting
1．7PRRSV-Nsp4基因突变毒株的病毒拯救与鉴定
1．8PRRSV病毒噬斑分析
2．2PRRSV-Nsp4介导了ZAP的降解
2．3Nsp4依赖其蛋白酶活性切割ZAP
2．4Nsp4拮抗ZAP的抗病毒活性
2．6Nsp4突变的PRRSV重组病毒降低了对ZAP的降解作用
3讨论
参考文献
第五章IL-7增强猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白免疫效应
1材料与方法
1．1细胞、病毒、试验动物与主要试剂
1．2重组杆状病毒的构建与表达
1．3疫苗制备
1．4疫苗免疫
1．5GP5抗体检测
1．6淋巴细胞增殖检测
1．7猪IL-4与IFN-γ检测
1．8攻毒保护试验
1．9肺脏病毒载量测定
1．10组织切片的制备
1．11组织切片染色(脏染色)
1．12数据统计
2结果
2．1重组杆状病毒供体质粒的双酶切鉴定
2．2重组杆状病毒的获取
2．3重组蛋白表达鉴定
2．4免疫后GP5抗体水平
2．5淋巴细胞增殖检测
2．6IL-4及IFN-γ检测
2．7攻毒后猪体温变化、存活率及肺脏病毒载量
2．8肺脏病理变化
3讨论
参考文献
全文总结
本文主要创新点
致谢
攻读博士期间发表的论文
南京农业大学;
