猪病毒性腹泻多重RT--PCR检测方法的建立及PEDV对细胞自噬的影响

目录

声明

摘要

第一章猪流行性腹泻的研究进展

1PED的流行病学

1．1PED的早期流行

1．2PED的流行现状

1．3PED的流行特点

2PEDV的病毒学

2．1冠状病毒的分类

2．2PEDV的形态结构

2．3PEDV的分离培养

2．4 PEDV复制过程

2．5PEDV的致病机理

2．6PEDV的常见检测方法

第二章猪病毒性腹泻多重RT-PCR检测方法的建立

1．材料

1．1试验毒株及病料

1．2工具酶及试剂

2．方法

2．1病料的处理

2．2总RNA、DNA的提取

2．3引物的设计

2．4RT-PCR方法的建立

2．5RT-PCR反应条件的优化

2．6敏感性和特异性检测

2．7多重RT-PCR检测方法的应用

3．试验结果

3．2多重RT-PCR检测方法的建立

3．3多重RT-PCR反应条件的优化

3．4敏感性与特异性鉴定结果

3．5临床样品检测结果

4．讨论

第三章PEDV与细胞自噬之间的关系

1材料

1．1主要材料

1．2试剂、抗体及试剂盒

2方法

2．1试验所需溶液配制

2．2Western Blot检测自噬相关蛋白

2．3共聚焦显微镜观察法

2．4电镜观察法

2．5检测细胞自噬对PEDV增殖的影响

3试验结果

3．1透射电镜观察结果

3．2共聚焦显微镜观察结果

3．3 Western Blot结果

3．4细胞自噬对PEDV增殖的作用

4讨论

第四章PEDV非结构蛋白nsp6对细胞自噬的影响

1 材料

1．1主要材料

1．2试剂、抗体及试剂盒

2方法

2．1试验所需溶液配制

2．2nsp6-pCAGGS-HA重组质粒的构建

2．3质粒的转染

2．4Western Blot检测LC3蛋白

2．5共聚焦显微镜观察法

2．6电镜观察法

3试验结果

3．1重组质粒的PCR检测

3．2nsp6在胞内表达情况的Western Blot检测

3．3共聚焦显微镜观察结果

3．4透射电镜观察结果

3．5自噬相关蛋白变化

4讨论

全文总结

参考文献

致谢