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论文说明
摘要
缩略词
第一章文献综述
1传染性法氏囊病病毒研究进展
1．1IBDV简介
1．2IBDV基因组特点
1．3IBDV蛋白功能
1．4IBDV致病机制研究进展
2MDA5研究进展
2．2RIG-I样受体(RLRs)
2．3MDA5结构
2．4MDA5功能
2．5禽源MDA5
3细胞自噬
3．1细胞自噬简介
3．2细胞自噬的分子机制
3．3细胞自噬与天然免疫
3．4细胞自噬与病毒
3．5细胞自噬的生物学意义
3．6细胞自噬受体
第二章IBDV感染DF-1细胞的转录组学分析
1材料
1．1细胞与毒株
1．2试剂与材料
1．3仪器与设备
2方法
2．1细胞培养、病毒感染和测序样品的制备
2．2细胞总RNA的提取
2．3高通量测序和文库构建
2．4生物信息学分析
2．5差异mRNA功能分析
2．6荧光定量PCR(qPCR)验证差异表达的基因
3结果
3．1mRNA非监督分层聚类分析
3．2IBDV感染后基因差异表达情况
3．3功能分析
3．4差异表达基因的qPCR验证
4讨论
第三章IBDV诱导MDA5降解的作用研究
1材料
1．1生物材料
1．2试剂与材料
1．3仪器与设备
2方法
2．1细胞培养
2．2质粒构建
2．3免疫共沉淀(Co-IP)及Western blot检测
2．4间接免疫荧光及激光共聚焦显微镜观察
2．5IBDV病毒的扩大培养与基因组dsRNA抽提
2．6药物处理
2．7细胞RNA的抽提
2．8荧光定量PCR(qRT-PCR)
2．9MDA5的沉默
2．10统计学分析
3结果
3．1IBDV诱导MDA5降解
3．2病毒蛋白VP3与MDA5互作
3．3IBDV VP3蛋白与MDA5共定位
3．4IBDV VP3蛋白不能诱导MDA5的降解
3．5IBDV基因组dsRNA诱导MDA5的降解
3．6IBDV基因组dsRNA类似物poly(I∶C)诱导MDA5的降解
3．7poly(I∶C)刺激作用下的MDA5可以通过自噬途径发生降解
3．8抑制自噬可稳定MDA5
3．9poly(I∶C)刺激情况下p62蛋白水平降低
3．10MDA5与p62互作
3．11MDA5与p62共定位
3．12MDA5的CARD和CTD结构域与p62互作
3．13自噬促进MDA5与p62的互作
3．14p62促进MDA5的降解
3．15沉默MDA5
3．16poly(I∶C)诱导MDA5自噬降解能够引起晚期IFN-β下调
4讨论
全文总结
参考文献
附录：常用试剂的配制
致谢
攻读硕士学位期间发表的文章
南京农业大学;
