声明
摘要
第一章细菌TonB能量系统的研究进展
1TonB能量系统的组成及结构
2依赖TonB的外膜转运体
3TonB能量系统作用机制
3．1螺旋模型
3．2穿梭模型
3．3牵引力模型
3．4PBP辅助模型
4To出能量系统的功能
4．1参与多种物质的运输
4．2对细菌致病性的影响
5TonB能量系统的多样性
6TonB蛋白的表达调控
7嗜水气单胞菌TonB系统
8研究意义
参考文献
第二章TonB能量系统在嗜水气单胞菌铁离子利用及致病过程中的作用
1材料与方法
1．1菌株、质粒及试验动物
1．2主要培养基、试剂及仪器
1．3引物设计
1．4TonB基因簇序列分析
1．5tonB基因缺失株的构建
1．6基因互补株的构建
1．7生长曲线测定
1．8限铁条件下tonB基因的转录水平检测
1．9铁复合物利用检测
1．11生物被膜形成能力检测
1．12细胞试验
1．13运动能力检测
1．14溶血活性检测
1．15蛋白酶活性检测
1．16统计分析
2结果
2．1嗜水气单胞菌TonB能量系统的结构特点
2．2tonB单基因缺失株的构建
2．3tonB双基因缺失株的构建
2．4ΔtonB123缺失株的PCR鉴定
2．5互补株的PCR鉴定
2．6生长曲线的测定
2．7限铁条件下tonB的转录水平测定
2．8铁结合蛋白的利用
2．9细菌对斑马鱼半数致死量检测
2．10生物被膜形成能力
2．12细胞毒性
2．13黏附试验
2．14运动性
2．15溶血活性检测
2．16蛋白酶活性检测
3讨论
参考文献
第三章TonB2介导应激激素促进嗜水气单胞菌的生长
1材料与方法
1．1菌株与质粒
1．2试剂及仪器
1．3主要溶液的配制
1．4引物设计
1．5基因缺失株的构建
1．6应激激素促生长试验
1．7激素抑制剂拮抗试验
1．8转铁蛋白对去甲肾上腺素促生长的影响
1．9转铁蛋白铁离子鳌合试验
1．10铁载体检测
1．11统计分析
2结果
2．1应激激素对嗜水气单胞菌生长的影响
2．2激素受体抑制剂对激素促生长作用的影响
2．3转铁蛋白对激素促生长作用的影响
2．4ΔamoA缺失株的PCR鉴定
2．5Amonabactin铁载体不参与激素介导的促生长作用
2．6TonB2参与激素介导的生长促进作用
3讨论
参考文献
第四章TonB能量系统影响嗜水气单胞菌鞭毛形成的机制
1材料与方法
1．1菌株及质粒
1．2主要培养基、试剂及仪器
1．3主要溶液的配制
1．3引物设计
1．4透射电镜观察
1．5比较蛋白组学分析
1．6差异蛋白转录水平检测
1．7鞭毛丝亚基蛋白FlaA和FlaB的原核表达及纯化
1．8FlaA及FlaB多克隆抗体制备
1．9细胞质蛋白、分泌蛋白、外膜蛋白的分离提取
1．10Western blot分析
1．11FlaA和FlaB过表达
1．14GST-FliS原核表达及纯化
1．16统计分析
2结果
2．1鞭毛透射电镜观察
2．2鞭毛蛋白转录分析
2．3ΔtonB123缺失株与野生株差异蛋白分析
2．4FlaA和FlaB原核表达及纯化
2．5FlaA和FlaB的免疫交叉反应
2．6鞭毛蛋白定位
2．7糖基化分析
2．8FlaA和FlaB蛋白过表达
2．9FliD对鞭毛蛋白分泌的影响
2．10GST-FliS原核表达及纯化
2．11鞭毛蛋白与FliS结合能力检测
3讨论
参考文献
第五章TonB能量系统对嗜水气单胞菌耐药性的影响
1材料与方法
1．1菌株与质粒
1．2主要培养基、试剂及仪器
1．3引物设计
1．4基因缺失株及互补株的构建
1．5药敏试验
1．6外排泵工作浓度测定
1．7外排泵抑制试验
2．1TonB系统对细菌耐药性的影响
2．2Fe3+对TonB系统介导细菌耐药性的影响
2．3外排泵抑制剂对TonB系统介导细菌耐药性的影响
2．4缺失株及互补株的鉴定
2．5To心系统参与MacA2-MacB2-TolC2介导的细菌耐药性
2．6外排泵抑制剂对MacA2-MacB2-TolC2介导细菌耐药性的影响
2．7实时荧光定量PCR检测
3讨论
参考文献
全文总结
致谢
博士期间发表的论文
南京农业大学;
