元宝山地区环境和鸡饲料镉污染调查及不同硒源拮抗其致鸡心脏损伤的比较

目录

声明

摘要

1引言

1．1镉的概述

1．1．1镉的性状及存在形式

1．1．2镉污染来源及分布

1．1．3我国镉污染现状

1．2镉的毒性

1．2．1镉的急性毒性

1．2．2镉的心脏毒性

1．2．3镉的肾脏毒性

1．2．4镉的其他毒性

1．2．5镉的毒性与氧化应激

1．3硒的概述

1．3．1硒的性状

1．3．2硒的来源与存在形式

1．3．3硒源种类与利用

1．4硒的作用

1．4．1抗氧化作用

1．4．2硒与癌症

1．4．3硒的心脏保护作用

1．4．4硒的作用机制

1．4．5硒对动物生产的作用

1．4．6硒的毒性

1．5目的与意义

2材料与方法

2．1主要仪器与试剂

2．1．1主要仪器

2．2试验设计

2．2．1调查样品采集地区

2．2．2元宝山农田土壤样品采集

2．2．3元宝山农田灌溉水样品采集

2．2．4元宝山鸡饲料样品采集

2．2．5试验动物分组与处理

2．2．6动物试验技术路线

2．2．7组织样品的采集与处理

2．2．8生产实践试验设计

2．3调查采集的样品镉含量检测

2．3．1采集的农田土壤样品pH的测定

2．3．2采集的农田土壤样品中镉含量的调查

2．3．3采集的农田灌溉水样品中镉含量的调查

2．3．4采集的鸡饲料样品中镉含量的调查

2．4试验鸡临床症状观察

2．5试验鸡心脏形态结构观察

2．5．1心脏脏器系数的测定方法

2．5．2心脏病理解剖学观察

2．5．3心脏病理组织学观察

2．5．4心脏超微结构观察

2．6试验鸡心脏组织中镉、硒含量检测方法

2．7试验鸡心脏功能检测

2．8试验动物心脏组织氧化与抗氧化功能的测定

2．8．1心脏组织匀浆液制备

2．8．2心脏组织抗氧化功能检测

2．9心脏组织mRNA表达水平的检测方法

2．9．1试验动物心脏组织总RNA的提取方法

2．9．2RNA反转录反应

2．9．3内参基因序列的设计及合成

2．9．4实时荧光定量PCR(qRT-PCR)

2．10心脏组织相关蛋白表达水平的检测方法

2．10．1心脏组织总蛋白的提取方法

2．10．2Westem Blot

2．11心脏组织中CYP450酶系的检测方法

2．11．1心脏微粒体的制备

2．11．2CYP450酶系的测定方法

2．11．3心脏组织中核受体应答及其亚基表达的检测方法

2．12试验鸡心脏组织中NO代谢的测定方法

2．12．1心脏组织蛋白含量测定

2．12．2心脏组织NO含量测定方法

2．12．3心脏组织NOS酶活性检测方法

2．12．4心脏组织中NOS分型表达的检测方法

2．13试验鸡心脏组织Nrf2信号通路相关因子表达的检测方法

2．13．1心脏组织Nrf2蛋白表达水平的检测

2．13．2心脏组织Nrf2及下游因子mRNA表达水平的检测方法

2．14试验鸡心脏组织NF-κB信号通路相关因子表达的检测方法

2．15试验数据的统计和分析

3结果与分析

3．1土壤、水、饲料镉含量调查结果

3．1．1元宝山农田土壤样品pH测定结果

3．1．2元宝山农田土壤样品镉含量调查结果

3．1．3赤峰市农田灌溉水镉含量调查结果

3．1．4元宝山鸡饲料镉含量调查结果

3．2试验鸡临床表现

3．2．1试验动物临床症状及体重变化结果

3．2．2心脏重量及其脏器系数变化

3．3试验鸡心脏组织形态学观察

3．4试验鸡心脏超微结构观察

3．5试验鸡心脏镉、硒含量检测结果

3．6心脏功能检测结果

3．7试验鸡心脏组织中抗氧化功能相关的检测结果

3．7．1心脏组织中T-AOC水平检测结果

3．7．2心脏组织中GSH含量及GST、GSH-Px活性的检测结果

3．7．3心脏组织中抗氧化酶的检测结果

3．8试验鸡心脏组织NO代谢检测结果

3．8．1心脏组织NOS酶活性的检测结果

3．8．2心脏组织NOS分型mRNA表达水平的检测结果

3．9试验鸡心脏组织CYP450酶系及核受体应答的检测

3．9．1心脏组织中CYP450及Cyt-b5含量的检测结果

3．9．2心脏组织中CYP450酶系活性的检测结果

3．9．3心脏组织中核受体因子mRNA表达水平的检测结果

3．9．4心脏组织中CYP450酶系亚基mRNA表达水平的检测结果

3．10试验鸡心脏组织Nrf2信号通路相关因子表达的检测结果

3．10．1心脏组织中Nrf2蛋白与基因水平的检测结果

3．10．2心脏组织中Nrf2信号通路相关因子表达水平的检测结果

3．11试验鸡心脏组织炎症反应机制相关的检测结果

3．11．1心脏组织炎性介质相关因子mRNA表达水平的检测结果

3．1 1．2心脏组织炎性介质NF-κB／IκB信号通路相关因子表达水平的检测结果

3．12生产试验体重结果

3．13生产试验鸡心脏组织硒、镉元素含量结果

3．14生产试验鸡生产性能的结果

4讨论

4．1元宝山地区农业环境镉污染情况

4．2元宝山地区鸡饲料镉污染情况

4．3不同硒源拮抗镉致鸡毒性的效应

4．3．1不同硒源拮抗镉致鸡组织中硒镉含量的影响

4．3．2不同硒源拮抗镉致鸡心脏损伤的效应

4．4不同硒源拮抗镉致鸡心脏氧化应激的机制

4．4．1不同硒源拮抗镉致鸡心脏氧化应激的效应

4．4．2Nrf2信号通路在不同硒源拮抗镉致鸡心脏氧化应激中的作用

4．5不同硒源拮抗镉致鸡心脏核受体应答反应的机制

4．6不同硒源拮抗镉致鸡心脏炎症反应的机制

4．6．1不同硒源拮抗镉致鸡心脏炎症的效应

4．6．2NF-κB／IκB信号通路在不同硒源拮抗镉致鸡心脏氧化应激中的作用

4．7饲料中添加纳米硒对生产鸡生产性能的影响

5结论

致谢

参考文献

附录

攻读博士学位期间发表的学术论文