IBV感染HD11细胞后细胞周期变化及对病毒复制影响的研究

目录

声明

摘要

1前言

1．1禽传染性支气管炎的研究概况

1．1．1病原学与流行病学

1．1．2临床症状和病理变化

1．1．3诊断与防治

1．2巨噬细胞功能

1．2．1天然免疫

1．2．2获得性免疫

1．2．3免疫调节因子与病毒感染的关系

1．3细胞周期

1．3．1细胞周期蛋白

1．3．2细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶

1．3．3细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子

1．3．4细胞周期与病毒感染的研究

1．4研究目的与意义

2实验材料与方法

2．1实验材料

2．1．1病毒和细胞

2．1．2试剂盒、工具酶和抗体试剂

2．1．3主要试剂配制及存储

2．1．4实验仪器设备

2．2实验方法

2．2．2IBV适应培养于HD11细胞后病毒生长曲线的绘制

2．2．3IBV感染HD11细胞后活力的检测

2．2．5IBV感染不同细胞周期HD11细胞后病毒滴度的变化

2．2．6细胞周期蛋白B1(CCNB1)真核重组表达质粒的构建

2．2．7CCNB1真核重组表达质粒的鉴定

2．2．8HD11细胞过表达CCNB1后细胞周期及病毒繁殖的变化

2．2．9数据统计与分析

3结果

3．1．2IBV感染HD11细胞后的PCR鉴定

3．1．3病毒生长曲线

3．2IBV感染HD11细胞后细胞周期的改变

3．2．2IBV感染HD11后不同时间点上TCID50的变化

3．2．3IBV感染诱导HD11细胞周期阻滞

3．2．4细胞周期阻滞与复制病毒的关系

3．2．5实时荧光定量PCR方法检测细胞周期蛋白的变化

3．3IBV感染HD11细胞后细胞因子的改变

3．5 CCNB1基因对HD11细胞周期及其病毒复制的影响

3．5．2CCNB1基因的真核表达载体的鉴定

3．5．3CCNB1过表达后对病毒复制的影响

3．6细胞周期同步化对免疫因子的影响

4讨论

4．1IBV M41株感染HD11细胞模型的建立

4．2IBV感染后引起细胞周期的改变

4．3细胞周期同步化与病毒复制的关系

4．4细胞周期同步化与免疫因子的关系

5结论

致谢

参考文献

附录

攻读硕士学位期间发表的学术论文