木薯硝态氮转运蛋白SLAH4在水稻改良中的应用

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致谢

摘要

1文献综述

1．1植物氮素利用

1．2硝态氮和铵态氮

1．3硝态氮吸收和转运

1．3．1硝态氮转运蛋白l(NRTI／PTR Family，NPF)

1．3．2硝态氮转运蛋白2(Nitrate Transporter2，NRT2)

1．3．3氯离子通道家族(Chloride channel，CLC)

1．3．4慢型阴离子通道家族(Slowly activating anion channel，SLAC)

1．4硝态氮的信号转导

1．4．1硝酸盐感受器

1．4．2钙离子信号

1．4．3转录因子

1．4．4ABA信号

1．4．5活性氧信号

1．5研究意义

2材料与方法

2．1实验材料

2．2．5CTAB法提取DNA

2．2．6提取RNA

2．2．7反转录反应

2．2．8荧光定量PCR

2．2．9转基因载体构建

2．2．10农杆菌转化

2．2．11农杆菌介导的花絮侵染法转化拟南芥

2．2．12筛选纯系

2．2．13亚细胞定位

2．2．14水稻叶绿素含量测定

2．2．15水稻净光合速率的测定

2．2．16水稻水培实验

2．2．17氮含量测定

3结果与分析

3．1生信分析

3．1．1 SLAC／SLAH基因的系统发育分析

3．1．2SLAC／SLAH基因结构和motif分析

3．1．3SLAC／SLAH基因启动子顺式作用元件分析

3．1．4SLAC／SLAH基因的染色体定位

3．2MeSLAH4蛋白的烟草亚细胞定位

3．3MeSLAH4在氮胁迫下不同组织的定量PCR

3．4MeSLAH4基因在拟南芥中的异源表达

3．4．1阳性株系的检测

3．4．2转基因拟南芥qPCR

3．5MeSLAH4基因在水稻中的异源表达

3．5．1转MeSLAH4水稻的阳性植株鉴定

3．5．2转MeSLAH4水稻qPCR

3．5．3转MeSLAH4水稻在施氮处理下叶绿素含量的测定

3．5．4转MeSLAH4水稻在施氮处理下光合速率的测定

3．5．5不同浓度硝酸盐处理水稻的表型观察

3．5．6氮含量结果

3．5．7籽粒性状表型

4结论与讨论

参考文献