基于CRISPR/Cas猪瘟与非洲猪瘟病毒核酸检测技术研究

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摘要

第一章文献综述

1重组酶介导等温扩增技术

1．1 RPA／RAA等温扩增技术的原理

1．2 RPA／RAA-LFA的应用

2 CRISPR新型核酸检测方法

2．1 CRISPR Cas蛋白的连带剪切活性

2．2 CRISPR／Cas核酸检测平台的发展

2．3 CRISPR／Cas检测方法在重大传染病中的应用

3非洲猪瘟

3．1非洲猪瘟和非洲猪瘟病毒

3．2非洲猪瘟流行史与现状

3．3非洲猪瘟的防控与诊断

4猪瘟

4．1猪瘟与猪瘟病毒

4．2猪瘟临床症状及流行史

4．3猪瘟感染与免疫的鉴别检测

5本文研究目的及意义

第二章CSFV强毒株与疫苗株CRISPR／Cas13a鉴别检测方法的建立

1．1试验材料

1．2试验方法

2结果与分析

2．1LwaCas13a原核表达

2．2LwaCas13a的纯化

2．3CRISPR／Cas13a强弱毒鉴别检测方法的建立

3结论与讨论

第三章ASFV CRISPR／Cas12a核酸检测方法的建立

1．1试验材料

1．2试验方法

2结果与分析

2．2AsCas12a的纯化

2．3AsCas12a连带剪切活性检测条件优化

2．4ASFV CRISPR／Cas12a检测方法的建立

2．5ASFV CRISPR／Cas12a-LFA检测方法的建立

2．6ASFV RAA-CRISPR／Cas12a-LFA方法的建立

2．7ASFV CRISPR／Cas12a-LFA与OIE推荐的PCR平行比对试验

3结论与讨论

第四章非洲猪瘟病毒重组酶介导等温扩增技术

1．1试验材料

1．2试验方法

2结果与分析

2．2ASFV RAA-LFA敏感性试验

2．3ASFV RAA-LFA特异性试验

2．4ASFV RAA-LFA稳定性试验

2．5RAA-LFA、PCR、qPCR平行比对试验

2．6核酸免提取RAA-LFA方法的建立

4结论与讨论

全文总结

参考文献

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