声明
中英文缩略词简表
1 文献综述
1.1 小麦育种概述
1.2 小麦组织培养研究进展
1.2.1 小麦组织培养中外植体的选择
1.2.2 小麦组织培养中培养基的优化
1.2.3 组织培养在小麦遗传育种中的应用
1.3 细胞分裂素与细胞分裂素氧化/脱氢酶
1.3.1 细胞分裂素
1.3.2 细胞分裂素氧化脱氢酶
1.4 CRISPR/Cas9基因编辑技术
1.4.1 CRISPR/Cas9系统的基本结构
1.4.2 CRISPR/Cas9系统的作用原理
1.4.3 CRISPR/Cas9基因编辑技术的应用
1.5 TILLING技术研究进展
1.5.1 TILLING技术的原理及操作流程
1.5.2 TILLING技术在小麦中的应用研究进展
1.6 本研究的目的和主要内容
2 小麦幼胚离体培养再生体系的建立
2.1 试验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 培养基
2.1.3 试验仪器
2.2 试验方法
2.2.1 无菌外植体的制备
2.2.2 愈伤组织的诱导
2.2.3 胚性愈伤继代培养
2.2.4 胚性愈伤分化培养
2.3 结果与分析
2.3.1 植物激素对小麦幼胚胚性愈伤组织诱导的影响
2.3.2 不同激素处理对小麦幼胚胚性愈伤组织分化的影响
2.4 讨论
3 小麦TaCKX1基因CRISPR/Cas9靶向编辑载体的构建
3.1 试验材料
3.1.1 菌种及载体
3.1.2 试验试剂及溶液配制
3.1.3 试验仪器
3.2 试验方法
3.2.1 载体骨架pTaU6-sgRNA质粒扩繁
3.2.2 质粒提取
3.2.3 pTaU6-sgRNA质粒酶切及回收
3.2.4 sgRNA靶点设计及其寡核苷酸链的合成
3.2.5 目的片段扩增
3.2.6 sgRNA重组载体的构建
3.2.7 连接产物转化
3.2.8 鉴定重组质粒及测序
3.2.9 载体骨架pYAO-Cas9线性化
3.2.10 PCR扩增pTaU6-sgRNA-TaCKX1重组质粒中的靶片段
3.2.11 同源重组
3.2.12 同源重组产物转化大肠杆菌感受态细胞
3.2.13 重组表达载体检测及测序
3.3 结果与分析
3.3.1 载体骨架pTaU6-sgRNA质粒酶切
3.3.2 pTaU6-sgRNA-TaCKX1重组质粒检测
3.3.3 载体骨架pYAO-Cas9线性化
3.3.4 PCR扩增
3.3.5 同源重组与测序
3.4 讨论
4 小麦原生质体的瞬时表达
4.1 试验材料
4.1.1 植物材料
4.1.2 试验试剂及溶液配制
4.1.3 试验仪器
4.2 试验方法
4.2.1 小麦原生质体分离过程
4.2.2确定原生质体最佳分离条件
4.2.3 PEG介导的原生质体转化和基因组DNA提取
4.3 结果与分析
4.3.1 酶解液的组成及酶解时间对原生质体产量的影响
4.3.2 叶片来源因素对原生质体产量的影响
4.3.3 PEG介导的原生质体转化
4.4 讨论
5 济麦22 号TILLING突变系TaCKX1突变位点的检测
5.1 试验材料
5.1.1 植物材料
5.1.2 试验试剂及溶液配制
5.1.3 仪器设备
5.2 试验方法
5.2.1 TILLING突变系DNA的提取及检测
5.2.2 全外显子捕获测序
5.2.3 济麦22 号小麦 TILLING 突变系TaCKX1基因突变位点检测
5.3 结果与分析
5.3.1 DNA纯度、浓度及质量检测
5.3.2 PCR扩增与连接转化
5.3.3 TaCKX1基因序列比对
5.4 讨论
结论及主要创新点
后续工作展望
参考文献
致谢
附录一 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录
烟台大学;
