人参提取物（人参总皂苷）对慢性阻塞性肺疾病肺脾气虚型大鼠免疫功能及NF-kB信号传导途径机制研究

摘要

目的：　　建立慢性阻塞性肺疾病大鼠模型，设置空白组，模型组，及人参提取物高、中、低剂量组，检测各组大鼠血液中CD3+、CD4+、CD8+的表达率及血清中IgG、IgA、IgM水平及IL-18、 TNF-a的活性，探析IL-18、TNF-a mRNA的基因表达，NF-kB信号传导途径在慢阻肺发病的联系；探明人参提取物对慢阻肺大鼠免疫功能及抑制其气道炎症是否通过NF-kB信号传导途径来调节。　　方法：　　将60只SD成年雄性大鼠随机分为6组,每组10只,分别为模型组、人参提取物高中低剂量组及地塞米松(DXM)阳性药对照组。通过观察各组大鼠整体情况、肺组织、HE染色病理切片评价慢阻肺大鼠动物模型以及人参提取物对慢阻肺大鼠的病理改变和炎症细胞水平的影响;运用MASSON麦氏染色后观察各组大鼠模型肺组织的胶原含量、平滑肌厚度等;应用图像分析系统测定COPD大鼠模型支气管平滑肌的厚度、气管内径等,计算支气管平滑肌的指数、胶原纤维面积;运用流式细胞仪测定大鼠模型血液中CD3+、CD4+、CD8+水平的表达率,并计算CD4+/CD8+的比值;采用ELISA试剂盒测定血清中IgG、IgA、IgM水平及IL-18、TNF-a的活性;液氮速冻研磨用trizol提取大鼠肺组织mRNA，通过逆转录后,对设计引物进行real-time PCR扩增,以内参为对照,观察各组大鼠模型肺组织中IL-18、TNF-a及 mRNA的基因表达情况;应用试剂盒提取大鼠肺组织中蛋白质,利用蛋白印迹(WB, Western blotting)方法,测定各组大鼠肺组织中NF-kB和I-kB的表达情况。　　结果：　　1.通过观察动物模型的整体情况及镜下显示肺组织病理学结果,证实成功复制慢阻肺肺脾气虚证动物的模型,为实验的顺利进行提供了依据;　　2.慢阻肺大鼠模型肺组织气道内炎症降低,胶原含量、胶原纤维面积、支气管平滑肌的指数改善,有效抑制慢阻肺大鼠的气道重塑,作用类似于或优于地塞米松,尤以人参提取物高、中剂量组为佳;　　3.人参提取物可以通过调节细胞因子水平，而降低慢阻肺大鼠血清中IgG、 IgA、IgM水平及IL-18、TNF-a的活性，从而提高慢阻肺大鼠细胞及体液免疫的功能,降低其慢阻肺急性发作的次数;　　4.不同剂量的人参提取物对慢阻肺大鼠模型 IL-18、TNF-a炎性标志物的浓度及IL-18、TNF-amRNA在肺组织的表达的影响具有一定的量效关系,尤以人参提取物高、中剂量组为佳，说明人参提取物可以抑制气道炎症，提高机体免疫力,增强其防病抗病的能力；　　5.人参提取物抑制气道炎症，改善慢阻肺肺组织的病理损害，防治COPD的可能作用机制是通过NF-kB信号传导途径，上调I-kB的表达完成。　　结论：　　本实验成功的复制了慢阻肺大鼠动物模型，使本研究针对性更强；通过分析相关数据，可以证实人参提取物通过调节血清中，IgG、IgA、IgM水平及IL-18、TNF-a的活性，增强慢阻肺实验大鼠的免疫功能水平，抑制慢阻肺气道炎症，改善气道重塑，其机制是通过NF-kB信号传导途径调解，从而抑制慢阻肺大鼠的气道炎症，调控免疫功能表达水平提高；通过下调慢阻肺炎症因子释放而调节慢阻肺大鼠的免疫功能。

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