榛花消肾胶嚢干预实验性糖尿病大鼠足细胞转分化wnt/β-catenin通路的研究

摘要

目的：　　糖尿病肾病（DN）是糖尿病常见而严重的微血管并发症，以蛋白尿，肾功能进行性恶化为主要特征，病理变化主要为肾小球滤过率改变，基底膜增厚，系膜细胞增宽，直至肾小球硬化，发展至肾功衰竭。其发病率之高，进展速度之快，严重威胁着人类的健康。　　糖尿病肾病的发病机制多而复杂，近几年，从蛋白尿产生机制角度入手，对足细胞的研究成为热点。各种原因导致足细胞的损伤参与了蛋白尿的产生，而改善足细胞功能的药物成为治疗糖尿病肾病的关注点和创新点。目前对于糖尿病肾病蛋白尿的治疗，西医多以降糖药、ACEI/ARB类药、改善循环为主，发展至中晚期则直接采用透析疗法维持。而中药在治疗蛋白尿方面取得良好效果，具有西药无法比拟的优势。榛花消肾胶囊是导师常用的治疗糖尿病肾病蛋白尿的方剂，在临床患者中取得满意疗效，本次实验是应用榛花消肾胶囊干预实验性糖尿病大鼠，观察该中药对足细胞相关分子及转分化wnt/β-catenin通路的影响，进一步证明榛花消肾胶囊治疗糖尿病肾病蛋白尿的有效性。　　方法：　　1.将Wistar大鼠高脂饲料喂养一个月后予链脲佐菌素（STZ）腹腔注射，复制糖尿病大鼠模型，将造模成功大鼠随机分成DM模型组，中药实验组，西药对照组，同时设立正常对照组。中药实验组予榛花消肾胶囊灌胃，西药对照组予罗格列酮合苯那普利做阳性对照。观察大鼠一般状态，检测血糖、血脂、肾功、尿量、尿微量白蛋白等变化。　　2.应用光学显微镜和透视电镜观察肾组织超微结构，观察榛花消肾胶囊对糖尿病大鼠肾脏病理组织结构的改变。　　3.采用免疫组化方法观察足细胞标志性分子nephrin、desmin、zo-1的蛋白表达；应用荧光定量PCR技术检测nephrin、desmin m RNA表达。　　4.采用免疫组化方法观察足细胞转分化wnt/β-catenin通路相关分子wnt-1、β-catenin、sail1蛋白表达；应用荧光定量PCR技术检测wnt-1、sail1m RNA表达。　　结果：　　1.榛花消肾胶囊能够改善实验性DM大鼠的一般状态以及多饮、多食、多尿、消瘦的临床症状。　　2.榛花消肾胶囊对实验性DM大鼠具有一定的降血糖、降低甘油三酯和胆固醇的作用，改善糖脂代谢。　　3.榛花消肾胶囊能够抑制实验性DM大鼠早期肾脏肥大，减少尿微量白蛋白的排出，降低血肌酐和尿素氮，改善肾功能。　　4.榛花消肾胶囊具有改善实验性DM大鼠肾脏组织的病理形态，减轻肾小球基底膜增厚，细胞外基质的积聚，系膜增生，改善足细胞形态，从而减轻DM性肾小球硬化。　　5.榛花消肾胶囊具有抑制实验性DM大鼠肾组织nephrin、zo-1蛋白及m RNA的表达，增加desmin蛋白及m RNA的表达。　　6.榛花消肾胶囊具有抑制实验性DM大鼠肾组织转分化wnt/β-catenin通路中wnt-1、β-catenin、sail1蛋白及m RNA的表达。　　结论：　　榛花消肾胶囊能够改善实验性DM大鼠一般状态以及多饮、多食、多尿、消瘦的症状；抑制早期肾脏肥大，减轻肾组织病理结构；具有降血糖、降低甘油三酯和胆固醇、减少尿微量白蛋白，降低血肌酐和尿素氮的作用。同时，榛花消肾胶囊亦能改善足细胞相关分子nephrin、zo-1、desmin表达，抑制足细胞转分化wnt/β-catenin信号转导通路分子wnt-1、β-catenin、sail1表达。说明榛花消肾胶囊是通过干预足细胞转分化wnt/β-catenin通路而发挥改善糖、脂代谢，减少尿蛋白，改善肾功的作用。　　导师南征教授认为消渴肾病的病机关键是毒损肾络，邪伏膜原。创造性地将中医学毒损肾络、邪伏膜原理论与西医学糖尿病肾病发病机制，肾小球滤过膜-足细胞结构及功能联系在一起。榛花消肾胶囊在解毒通络、疏利膜原、益肾导邪的治疗大法指导下，通过干预足细胞转分化wnt/β-catenin通路而发挥治疗糖尿病肾病的作用。

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