雷公藤多苷片致卵巢早衰大鼠模型学研究和补肾调冲方对卵巢早衰大鼠卵巢功能及其相关因子TNF-ɑ和AMH表达的影响

摘要

目的：　　1、对比雷公藤多苷片和环磷酰胺两种药物制造卵巢早衰大鼠动物模型的优劣，选出最理想动物模型，为最终确定药效学动物模型的用药提供依据。　　2、在前一实验研究的基础上选定雷公藤多苷片制造卵巢早衰动物模型，在造模结束后用补肾调冲方不同剂量进行治疗，在造模的同时用补肾调冲方不同剂量进行预防。观察补肾调冲方对卵巢早衰大鼠的治疗作用及预防作用，并探讨其作用机制。为中医应用补肾调冲方治疗卵巢早衰提供临床借鉴；为进一步印证“肾主生殖”及“冲任学说”提供理论依据。　　方法：　　实验一-模型学研究：选用SPF级SD健康雌性大鼠按体重分层随机分为雷公藤多苷片组（以下简称雷公藤组）、环磷酰胺组及对照组。雷公藤组采用雷公藤多苷片75mg/kg灌胃，每日1次，连续造模14d。环磷酰胺组采用腹腔注射环磷酰胺75mg/kg，每日1次，连续造模14天。对照组自由饮水14d。观察各组大鼠的血清激素水平、光镜下大鼠卵巢组织形态学。　　实验二-药效学研究：选用SPF级SD健康雌性大鼠按体重分层随机分为8组，即空白组，模型组，补肾调冲方治疗高、中、低剂量组，西药组，补肾调冲方预防高、中剂量组，每组各10只。除空白组以外，其他各组均用雷公藤多苷片75mg/kg灌胃，每日1次，连续14d，制造卵巢早衰大鼠的动物模型。补肾调冲方治疗组在造模结束后用补肾调冲方不同剂量进行治疗，补肾调冲方预防组在造模的同时给予补肾调冲方不同剂量进行预防。以各组间大鼠血清的激素水平、大鼠卵巢组织形态学、大鼠卵巢组织相关细胞因子AMH、TNF-α的蛋白和基因表达水平作为观察指标，观察补肾调冲方对卵巢早衰大鼠的治疗作用及预防作用。　　结果：　　实验一：　　1、各组大鼠血清激素水平检测结果：雷公藤组、环磷酰胺组与对照组三组间FSH、LH、E2、AMH、INHB的水平差异均有统计学意义（P<0.05）；雷公藤组与环磷酰胺组FSH、LH水平均高于对照组FSH、LH的水平，差异有统计学意义（P<0.05）；雷公藤组与环磷酰胺组E2、AMH、INHB水平均低于对照组E2、AMH、INHB的水平，差异有统计学意义（P<0.05）。　　2、各组大鼠卵巢组织形态学的检测结果：雷公藤组大鼠卵巢体积萎缩，卵泡生长少，部分被纤维组织所代替；黄体数量少，卵泡颗粒细胞层减少。与对照组相比，卵巢组织中各级卵泡减少，部分卵泡可见淋巴细胞浸润，间质亦见少量炎细胞浸润；环磷酰胺组大鼠卵巢体积略有萎缩，卵泡生长稍有减少，黄体数量略少，卵巢的改变均轻于雷公藤模型组。卵巢组织结构与对照组相比大致相似，见个别卵泡中有淋巴细胞浸润及少量炎细胞浸润。此外，雷公藤组、环磷酰胺组和对照组三组间卵泡计数水平差异有统计学意义（P<0.05）。　　实验二：　　1、各组大鼠血清激素水平检测结果：各组间FSH、LH、E2及AMH的水平差异均有统计学意义（P<0.05）；各处理组与空白组相比较差异均有统计学意义（P<0.05）；模型组和雷公藤+补肾调冲方治疗低剂量组FSH、LH、E2及AMH的水平与其他各处理组FSH、LH、E2及AMH的水平，差异均有统计学意义（P<0.05）；雷公藤+补肾调冲方治疗中剂量组、雷公藤+补肾调冲方治疗高剂量组和雷公藤+西药组与其他处理组FSH、LH、E2及AMH的水平，差异均有统计学意义（P<0.05）。　　2、各组大鼠卵巢组织AMH、TNF-α的蛋白检测结果：模型组AMH的蛋白表达水平较空白组明显降低，图片显示黄染颗粒数量少且黄染色浅，阳性表达率最低。模型组TNF-α的蛋白表达水平较空白组明显升高且图片显示黄染颗粒数量多且黄染色深，阳性表达率最高。与模型组相比较，补肾调冲方各组AMH的蛋白表达明显升高而TNF-α的蛋白表达明显降低。　　3、各组大鼠卵巢组织AMH、TNF-αmRNA的检测结果：各组间AMH、TNF-αmRNA水平差异均有统计学意义（P<0.05）；各处理组与空白组比较差异均有统计学意义（P<0.05）；模型组和雷公藤+补肾调冲方治疗低剂量组AMH mRNA水平差异无统计学意义（P>0.05），与其他各处理组AMH mRNA水平，差异均有统计学意义（P<0.05）；雷公藤+补肾调冲方治疗中剂量组、雷公藤+补肾调冲方治疗高剂量组比较AMH mRNA水平差异无统计学意义（P>0.05），与其他各处理组AMH mRNA水平，差异有统计学意义（P<0.05）；雷公藤+西药组与雷公藤+补肾调冲方预防中剂量组间AMH mRNA水平差异无统计学意义（P>0.05），与其他各处理组AMH mRNA水平差异均有统计学意义（P<0.05）；雷公藤+补肾调冲方预防组中剂量和雷公藤+补肾调冲方预防高剂量组间AMH mRNA水平差异无统计学意义（P>0.05），与其他各处理组AMH mRNA水平差异均有统计学意义（P<0.05）。模型组、雷公藤+补肾调冲方治疗低剂量组和雷公藤+补肾调冲方治疗中剂量组TNF-αmRNA水平差异无统计学意义（P>0.05），与其他各处理组TNF-αmRNA水平，差异均有统计学意义（P<0.05）；雷公藤+补肾调冲方治疗高剂量组、雷公藤+西药组与各处理组TNF-αmRNA水平，差异有统计学意义（P<0.05）；雷公藤+补肾调冲方预防中剂量组和雷公藤+补肾调冲方预防高剂量组间TNF-αmRNA水平差异无统计学意义（P>0.05），与其他各处理组TNF-αmRNA水平差异均有统计学意义（P<0.05）。　　4、光镜下大鼠卵巢组织形态学的检测结果：模型组大鼠卵巢体积萎缩，卵泡生长少且部分被纤维组织代替，闭锁卵泡多，黄体数量少。经中药补肾调冲方干预后各级卵泡及黄体生长情况良好。　　结论：　　1、对比雷公藤组、环磷酰胺组及对照组的大鼠血清激素水平及卵巢组织形态学检测结果，发现用雷公藤多苷片制造卵巢早衰动物模型较环磷酰胺制造卵巢早衰动物模型更理想。　　2、补肾调冲方可调节卵巢早衰大鼠的血清激素水平，降低血清中FSH、LH的含量，增加血清中E2、AMH含量，减少闭锁的卵泡数，保护卵巢早衰模型大鼠始基卵泡库存。此外，通过光镜观察到，补肾调冲方不仅可增加卵巢的原始卵泡数、初级卵泡数及次级卵泡数，促进卵泡成熟并排卵，还可增加黄体数量，改善卵巢功能。　　3、临床上使用对卵巢有伤害的药物治疗疾病时，可提前使用补肾调冲方以保护卵巢，使卵巢免受伤害或将损害降低到最小。体现了中医“治未病”的思想。　　4、中药补肾调冲方可以从多角度，多靶点，多途径来调整性腺轴功能，改善卵巢早衰大鼠的卵巢储备功能。

目录

声明

英文缩略词表

前言

实验一 雷公藤多苷片致卵巢早衰大鼠模型学研究

1 材料与方法

2 实验结果

3 结论

实验二 补肾调冲方对卵巢早衰大鼠卵巢功能及其相关因子TNF-ɑ和AMH表达的影响

1 材料与方法

2 实验操作

3 实验结果

4 结论：

讨论

1 中医学对女性生殖轴的认识

2 补肾调冲方立法依据

3 POF模型的制备

5 补肾调冲方对卵巢早衰大鼠的影响

结论

参考文献

综述:卵巢早衰的中西医研究进展

2 西医学对卵巢早衰的认识

3 结论

参考文献

致谢

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