蒙药复方协日嘎-4药效物质基础研究

摘要

目的：本文通过对协日嘎-4中化学成分进一步系统分离，并对分离得到的化合物进行富集、纯化，为协日嘎-4后期药效物质基础研究提供依据；课题组前期已对协日嘎-4网络药理学进行了研究，建立了协日嘎-4的化学成分-靶点及化学成分-靶点-疾病的网络模型，结果显示，协日嘎-4有多条途径可以治疗前列腺癌和前列腺增生，反应出中药“多成分、多靶点”的特点，本文将进一步对协日嘎-4中化学成分与前列腺癌和前列腺增生相关受体进行分子对接研究，旨在阐明协日嘎-4与前列腺癌和前列腺增生相关靶点的相互作用和结合模式；通过建立庆大霉素致大鼠肾损伤模型，探索协日嘎-4对肾脏和前列腺的保护作用；高效液相色谱法测定协日嘎-4中4种有效成分的含量；对协日嘎-4进行血清药物化学研究，测定大鼠血清、尿液中总酚酸的含量，并对正常大鼠、模型大鼠血清中总酚酸的药动学进行比较研究。　　方法：用大孔吸附树脂（MAR）、MCI树脂、葡聚糖凝胶（Sephadex LH-20）、硅胶柱色谱（SCC）等技术对协日嘎-4进行分离、纯化，通过氢谱、碳谱（1H-NMR、13C-NMR）鉴定化合物的结构。　　利用Autodock软件对协日嘎-4中32个化合物分别与雄激素、雌激素、环氧合酶-2、B淋巴细胞瘤-2基因、白介素1、白介素6、白介素8、前列腺酸性磷酸酶、醛糖还原酶9个前列腺癌和前列腺增生相关受体进行分子对接，判断受体与化合物之间结合自由能的大小，并分析二者之间的相互作用力和结合模式。　　将大鼠随机分为空白组、模型组、协日嘎-4治疗组、前列舒通组、肾炎消肿片组、强的松组，除正常组以外，所有组大鼠皮下注射庆大霉素诱导急性肾损伤（Acute kidney injury），分别给予相应药物治疗，给药结束后，用ELISA试剂盒检测肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿蛋白（UP）、尿酶（NAG）、肾损伤因子（KIM-1）的表达水平，并计算各组肾脏指数和前列腺指数。　　高效液相色谱法（HPLC）测定协日嘎-4中黄芩苷、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量。　　紫外可见分光光度法（UV）测定大鼠血清、尿液中总酚酸的含量，并对正常大鼠、模型大鼠血清中总酚酸的含量进行药动学研究。　　结果：分离得到7个化合物，分别为黄芩苷、姜黄素、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、汉黄芩素、盐酸小檗碱、栀子苷。　　通过协日嘎-4的分子对接研究，结果表明，齐墩果酸与所有受体结合能都较低，汉黄芩素、姜黄素、山奈酚、异鼠李素、大黄素、熊果酸、β-谷甾醇、槲皮素、去甲氧基姜黄素、束骨姜黄醇、异槲皮苷、小檗碱、大黄素甲醚与环氧合酶-2受体、醛糖还原酶受体、雄激素受体、白介素6受体、白介素8受体结合能较低。　　通过SPSS方差分析，协日嘎-4对庆大霉素所致肾损伤有很好的保护作用，并对肾损伤导致的前列腺指数增大有一定的治疗效果，其中协日嘎-4治疗组与模型组比，肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿蛋白（UP）、尿酶（NAG）、肾损伤因子（KIM-1）水平均有很大程度的下降，肾脏指数和前列腺指数也有不同程度的下降；本文建立了高效液相色谱法测定协日嘎-4中有效成分含量的方法；建立了紫外可见分光光度法测定大鼠血清、尿液中总酚酸的含量，并对正常大鼠、模型大鼠血清中总酚酸的含量进行药动学比较研究。　　结论：通过对协日嘎-4的分子对接研究，阐明了协日嘎-4与前列腺癌和前列腺增生相关靶点的相互作用和结合模式，为后期验证协日嘎-4与前列腺癌和前列腺增生的靶向研究提供参考。协日嘎-4能够对庆大霉素所致肾损伤有很好的保护作用，并对肾损伤导致的前列腺指数增大有一定的治疗效果。对协日嘎-4进行血清药物化学研究，通过模型大鼠与正常大鼠血清中总酚酸的比较研究，阐明协日嘎-4中总酚酸对于治疗非细菌性前列腺炎的相关性。

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