蒙药“诃子解草乌毒”减毒存效机理的代谢组学研究

摘要

目的：从代谢组学角度，采用高效液相与质谱联用的方法研究蒙药“诃子解草乌毒”减毒存效机理。　　方法：（1）药效学研究。将小鼠随机分成空白组（B）、生草乌组（S）、诃子制草乌组（Z）、草乌-诃子1∶1配伍组（YY）、草乌-诃子1∶3配伍组（YS）、阳性组（P）（阿司匹林片剂量0.4g/kg），按生草乌0.12g/kg的剂量给药，连续给药7d，进行热板反应试验、醋酸扭体法试验、二甲苯所致小鼠耳廓肿胀试验、棉球肉芽肿试验，比较每组小鼠肉芽肿胀抑制率、耳肿胀抑制率、扭体次数及舔足潜伏期。（2）生草乌急性毒性及诃子解毒作用的代谢组学研究。将小鼠随机分为空白组（B）、生草乌组（S）、诃子制草乌组（Z）、草乌-诃子1∶1配伍组（YY）、草乌-诃子1∶3配伍组（YS），每组10只，每组给药剂量为0.36g/kg，给药45min后取血获得血清待测，获得生草乌急性毒性的生物标志物和代谢通路。（3）生草乌长期给药后研究诃子对于生草乌所致毒性解毒作用的代谢组学研究。将大鼠随机分成空白组（B）、生草乌组（S）、诃子制草乌组（Z）、草乌-诃子3∶1配伍组（SY）、草乌-诃子1∶1配伍组（YY）、草乌-诃子1∶3配伍组（YS），按生草乌0.12g/kg的剂量给药，连续给药4周，并观察每组大鼠体重的变化情况；大鼠于最后一次给药12h后取血获得血清样本本待测，获得生草乌长期给药所致毒性的生物标志物和代谢通路；试剂盒测定大鼠血清cTn-I、MB、AST、ALT、TBIL、Cr的含量；取完血的大鼠处死后，迅速取心脏、肝脏、肾脏，经HE染色观察其病理结构；对每组大鼠进行开场行为学研究，记录每只大鼠5分钟内走动的距离和站立次数，并检测每组大鼠大脑中甘氨酸、谷氨酸和乙酰胆碱的含量。　　结果：（1）与空白组相比，生草乌组、制草乌组、草乌-诃子1∶1配伍组、草乌-诃子1∶3配伍组使小鼠舔足潜伏期明显延长（P＜0.05），扭体次数明显降低（P＜0.05），耳肿胀的抑制率明显升高（P＜0.05），肉芽肿抑制率明显升高（P＜0.05），且与生草乌组相比，制草乌组、草乌-诃子1∶1配伍组、草乌-诃子1∶3配伍组无差异，表明生草乌组、制草乌组、草乌-诃子1∶1配伍组、草乌-诃子1∶3配伍组都表现出了明显的镇痛抗炎作用。（2）由score图可知生草乌对小鼠的代谢干扰明显，制草乌组、草乌-诃子1∶1配伍组、草乌-诃子1∶3配伍组对于生草乌的干扰有明显的逆转现象。生草乌急性毒性的生物标志物有精氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、谷氨酸、丙氨酸、葡萄糖、组胺。分析数据，结果显示与空白组对比生草乌组的精氨酸、脯氨酸、丙氨酸、谷氨酸、葡萄糖含量显著降低，苯丙氨酸和色氨酸含量显著升高；制草乌组中精氨酸、脯氨酸、丙氨酸、谷氨酸、葡萄糖含量明显回高，苯丙氨酸、色氨酸含量明显降低，证明诃子炮制可以降低生草乌对于小鼠的急性毒性作用；代谢通路有：能量代谢，色氨酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、丙氨酸和谷氨酸代谢。（3）随着给药时间的延长空白组、诃子制草乌组、草乌-诃子3∶1配伍组、草乌-诃子1∶1配伍组、草乌-诃子1∶3配伍组大鼠的体重都在逐渐增加；而生草乌组大鼠在前两周体重增长的速度与其他组相近，后两周体重几乎没有增长。生草乌长期给药所致毒性的生物标志物有脯氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、丝氨酸、甘氨酸、尿素、柠檬酸；与空白组相比，生草乌组的苏氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、丝氨酸、甘氨酸、尿素、柠檬酸含量显著降低（P＜0.05），脯氨酸含量显著升高（P＜0.05）；制草乌组、草乌-诃子1∶1配伍组、草乌-诃子1∶3配伍组、草乌-诃子3∶1配伍组的生物标志物的水平都有不同程度的逆转，逆转程度是：制草乌组＞草乌-诃子3∶1配伍组＞草乌-诃子1∶1配伍组＞草乌-诃子1∶3配伍组；代谢通路有酰胺mRNA生物合成,甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸代谢,甲烷代谢,组氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,乙醛酸和二羧酸代谢六条代谢通路。生草乌组cTn-I、MB、AST、ALT、TBIL、Cr的含量明显增加（P＜0.05），并结合每组大鼠心脏、肝脏以及肾脏病理结构的结果，可以看出生草乌对大鼠的心脏、肝脏和肾脏造成一定的损伤；诃子制草乌组、草乌-诃子3∶1配伍组、草乌-诃子1∶1配伍组、草乌-诃子1∶3配伍组cTn-I、MB、AST、ALT、Cr、TBIL的含量有所降低，其中制草乌组cTn-I、MB、AST、ALT、Cr、TBIL的含量与空白组相近，从大鼠心脏、肝脏以及肾脏病理结构的结果也可以看出诃子制草乌组、草乌-诃子3∶1配伍组、草乌-诃子1∶1配伍组、草乌-诃子1∶3配伍组均有改善这样的损伤，但制草乌组的改善效果最佳。　　结论：诃子对于生草乌镇痛抗炎的作用没有影响，还可以降低生草乌长期给药和单次给药所致的心脏毒性、肝脏毒性和肾脏毒性，并且诃子炮制草乌对于对于生草乌“减毒存效”的效果最佳，作用最好。

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