日粮中蛋氨酸和赖氨酸水平对肉鸡生产性能及基因组甲基化的影响

摘要

本文研究了日粮中不同蛋氨酸和赖氨酸摄入水平对肉鸡屠宰性能和肉品质以及肉鸡基因组DNA和特定基因MSTN甲基化的影响，初步探讨了日粮氨基酸营养影响肉鸡屠宰性能和肉品质的分子机理。
　　 1.测定了55日龄肉鸡不同氨基酸水平组的屠宰性能，结果表明对照组平均体重最高为0.825kg，平均活体重A组(met和lys均缺乏)为最低仅0.368kg，两者差异显著(P＜0.05)；胴体重基本与肉鸡总活体重变化保持一致，同样对照组为最高0.740kg，A组最低0.328kg，两组差异显著(P＜0.05);对照组和F组(lys过量met正常)半净膛重和全净膛重最高，A组半净膛重最低，且均与A组差异显著；各组份间屠宰率、半净膛率和全净膛率几乎都不显著(P＞0.05)；
　　 2.采用高效液相色谱法(HPLC)测定不同met和lys水平下肉鸡肌肉和肝脏组织整体基因组甲基化水平，结果表明：肉鸡肌肉组织总平均DNA甲基化含量为27.62％，21日龄、35日龄和55日龄肌肉组织平均甲基化含量分别为34.60％、30.39％和17.87％，随日龄增加肉鸡肌肉组织平均DNA甲基化含量呈降低趋势。肉鸡肝脏组织平均甲基化含量为25.25％，其中21日龄、35日龄和55日龄肝组织样本平均甲基化含量分别为37.66％、22.06％和16.03％，可以看出随日龄增加肉鸡肝脏组织平均DNA甲基化含量也呈降低趋势。
　　 3.分析了55日龄肉鸡肌肉、肝脏组织的甲基化含量和屠宰性能之间相关性，结果表明：肉鸡肌肉甲基化含量与55日龄肉鸡总活体重、胴体重成显著正相关，相关系数分别为0.774和0.775，与屠宰率、半净膛率和全净膛率成负相关，相关系数分别为-0.293、-0.464和-0.091；肉鸡肝脏甲基化含量与55日龄肉鸡总活体重、半净膛重、全净膛重成显著正相关，相关系数分别为0.763、0.768和0.785，与屠宰率和半净膛率成负相关，相关系数分别为-0.502和-0.161。
　　 4.测定55日龄肉鸡不同氨基酸(met和lys)水平组肉质指标，包括滴水损失率、熟肉率、嫩度、pH值，结果表明：C组(lys缺乏met正常)、E组(met过量lys正常)滴水损失率较高，且与对照组(Z组)均差异显著(P＜0.05)；A组剪切力为7个组中最高达45.09N，比对照组高出22.33N，差异显著(P＜0.05)；B组(met缺乏lys正常)熟肉率最高，与对照组相吡高出11.9％，且两者差异显著；在7个组分中对照组pH值最大6.72，与A组、D组(met和lys均过量)差异显著。
　　 5.分别测定了21日龄、35日龄和55日龄肉鸡肌肉组织MSIN基因第一外显子区域甲基化水平，结果表明：21日龄时对照组8个位点都处于甲基化的状态，其次为D组6个位点被甲基化，2446-7bp和2451-2bp处未被甲基化，而A组仅一处(2355-6bp)被甲基化；35日龄时对照组甲基化程度最高，8个位点中5个被甲基化，甲基化率为62.5％。其次为D组，4个位点被甲基化，甲基化率为50％。A组仅2456-7bp处被甲基化，甲基化率为12.5％；55日龄时对照组8个位点均被甲基化，其次为A组5个位点被甲基化；
　　 6.测定了不同氨基酸水平下55日龄肉鸡MSTN基因mRNA的表达情况，由灰度值计算，D组相对表达量较高，而A、E和F组相对表达量较低，这与55日龄肉鸡肌肉组织MSTN基因第一外显子区域甲基化水平呈负相关，这也证实了基因的表达与其甲基化水平呈负调控。

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致谢

第一章 绪 论

1.1 DNA甲基化的概念

1.2 DNA甲基化的研究方法

1.2.1全基因组水平甲基化分析方法

1.2.2单个CG位点DNA甲基化的检测方法

1.3生长抑制素基因(MSTN)

1.3.1 MSTN基因的结构

1.3.2 MSTN基因的表达

1.3.3 MSTN基因的表达产物在不同动物中具有高保守性

1.3.4 MSTN基因的作用机理

1.3.5研究MSTN基因的意义

1.4日粮营养水平影响基因表达以及DNA甲基化

1.5日粮蛋白或限制性氨基酸影响肉鸡生长发育

1.5.1蛋白质影响肉鸡生长发育

1.5.2限制性氨基酸影响肉鸡生长发育

1.6蛋白或氨基酸对肉鸡品质的影响

1.7本研究的内容和目的

第二章 材料与方法

2.1试验材料

2.1.1肉鸡分组与饲养

2.2主要仪器设备

2.3所用常规试剂及试剂盒

2.4常规溶液及试剂配制

2.5引物

2.6实验方法

2.6.1肉鸡肌肉组织中氨基酸含量测定

2.6.2 DNA抽提

2.6.3 RNA提取

2.6.4逆转录合成cDNA

2.6.5几种缓冲液的配制

2.6.6 1.0％琼脂糖凝胶的配制

2.6.7基因组DNA甲基化的测定方法

2.6.8特定基因(MSTN)甲基化的测定

2.6.9肉鸡屠宰性能和肉质指标的测定

第三章 55日龄肉鸡屠宰性能与基因组DNA甲基化相关性研究

3.1不同处理水平的lys和met对55日龄肉鸡屠宰性能的影响

3.2肉鸡肌肉、肝脏组织色谱图

3.3基因组DNA甲基化与肉鸡屠宰性能相关性分析

3.4讨论

3.4.1 DNA甲基化测定方法

3.4.2氨基酸营养影响肉鸡屠宰性能

3.4.3氨基酸营养对肉鸡基因组DNA甲基化的影响

3.4.4基因组DNA甲基化与肉鸡屠宰性能相关性分析

第四章 肉鸡生长抑制素基因(MSTN)基因甲基化水平与肉质性能分析

4.1 55日龄肉鸡肉质指标测定结果

4.2肌肉组织met和lys含量测定

4.3 MSTN基因第一外显子区域甲基化分析

4.4 55日龄肉鸡MSTN基因mRNA表达

4.5讨论

4.5.1日粮中蛋白或氨基酸水平对肉鸡肉品质的影响

4.5.2蛋氨酸调控特异位点DNA甲基化

4.5.3蛋白或氨基酸营养对基因表达的影响

4.5.4日粮限制性氨基酸营养影响肉鸡肉品质机理分析

第五章 结论与展望

5.1结论

5.2展望

参考文献

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