醒脑液对APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠脑内Aβ及其降解酶NEP表达的影响

摘要

目的：本课题拟从研究β-淀粉样蛋白（Aβ）及其降解酶Neprilysin（NEP）基因和蛋白表达着手，探讨中药复方醒脑液（XNY）对APPswe/PS1ΔE9的双转基因小鼠大脑内Aβ蛋白及其降解酶NEP表达的影响，并同时从中医痴呆理论角度分析复方醒脑液的作用机制，从而为临床治疗阿尔茨海默病（AD）提供深层分子机制和理论依据。　　方法：利用 Morris水迷宫分别观测正常对照组、模型组、西药对照组、醒脑液高剂量组、醒脑液中剂量组和醒脑液低剂量组小鼠空间学习记忆能力；采用免疫组织化学方法检测各组小鼠大脑组织中老年斑的表达情况；采用实时荧光定量 PCR技术检测各组小鼠大脑组织中 NEPmRNA的表达；以免疫蛋白印迹 Westernblots法分别观测各组小鼠大脑组织中 NEP蛋白的表达情况。实验结果皆以均数?标准差表示（x±s），组间比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA），P<0.05为有统计学意义，P<0.01为有显著统计学意义。　　结果：SPF级75只健康雄性三月龄双转基因痴呆小鼠，15只雄性同月龄正常小鼠。Morris水迷宫结果显示：游泳持续时间模型组明显高于正常组，差异具有统计学意义（P<0.05）。西药组和XNY高剂量组明显低于模型组，差异具有统计学意义（P<0.05）。第四象限持续时间模型组明显低于正常组（P<0.05），阳性对照组、XNY高剂量组、XNY中剂量组高于模型组（P<0.05）；免疫组织化学法结果显示：显微镜下观察老年斑为淀粉样物质且呈棕色，广泛分布于小鼠大脑组织中海马及皮层部位。模型组老年斑数目较多，面积较大。经统计，小鼠脑组织中老年斑累积光密度值由高到低依次为模型组、XNY低剂量组、XNY中剂量组、XNY高剂量组、阳性对照组。阳性对照组、XNY高剂量组明显低于模型组，差异具有统计学意义（P<0.01）；实时荧光定量PCR结果显示：小鼠大脑组织中NEPmRNA表达的含量由高到低依次为正常组、西药组、XNY高剂量组、XNY中剂量组、XNY低剂量组、模型组。模型组与正常组之间的差异有统计学意义（P<0.01）。西药组和XNY高剂量组明显高于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）。XNY中剂量组和XNY低剂量组与模型组之间的差异无统计学意义（P>0.05）。西药组与XNY高剂量组之间的差异无统计学意义（P>0.05）。XNY中剂量组和XNY低剂量组与XNY高剂量组之间的差异有统计学意义（P<0.05）；免疫蛋白印迹法结果显示：小鼠大脑组织中NEP蛋白表达的含量由高到低依次为正常组、西药组、XNY高剂量组、XNY中剂量组、XNY低剂量组、模型组。模型组与正常组之间的差异有统计学意义（P<0.01）。西药组和XNY高剂量组、XNY中剂量组明显高于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）。XNY低剂量组与模型组之间的差异无统计学意义（P>0.05）。　　结论：中药复方制剂醒脑液能有效改善阿尔茨海默病模型小鼠的认知功能和提高其学习记忆能力，降低小鼠大脑组织中海马及皮层部位老年斑的沉积，上调大脑组织中性内肽酶基因和蛋白的表达。醒脑液的作用机制可能与干预淀粉样蛋白的代谢过程，并促进脑内中性内肽酶的活性，进而加速脑内毒性蛋白的降解或间接抑制其生成有关。

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引言

第1章 实验研究

1.1 材料与方法

1.1.1 实验动物

1.1.2 实验药品

1.1.3 实验试剂

1.1.4 实验仪器

1.1.5 实验方法

1.2 结果

1.2.1 各组小鼠Morris水迷宫测试结果的比较

1.2.2 醒脑液对老年斑表达干预的影响

1.2.3 产物鉴定：各产物的溶解曲线呈现单峰，表明单一片段扩增

1.2.4 醒脑液对PAP双转基因痴呆小鼠NEP基因表达的影响

1.2.5 醒脑液对PAP双转基因痴呆小鼠NEP蛋白表达的影响

1.3 讨论

1.3.1 APPswe/PS1ΔE9双转基因痴呆模型小鼠的选择

1.3.2 行为学Morris水迷宫的选择

1.3.3β-淀粉样肽及其降解酶NEP研究进展

1.3.4 从中医痴呆理论方面对阿尔茨海默病的认识

1.3.5 浅析醒脑液组方及对治疗AD的认识

1.4 结论

参考文献

第2章 综 述老年性痴呆的中医药诊断和治疗研究进展

2.1 中医诊断

2.1.1 疾病诊断

2.1.2 证候诊断

2.2 中医药治疗

2.2.1 辨证论治治疗

2.2.2 专方治疗

2.2.3 从病位论治

2.2.4 从五神论治

2.2.5 从“清法”与“补法”论治

2.3 近几年来主要知名复方研究进展

2.4 小结

附录中药醒脑液的制备

致谢

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