粒毛盘菌YM120多糖的结构表征、磷酸化修饰及其活性研究

摘要

本文对粒毛盘菌YM120的发酵提取、分离纯化、结构特征、磷酸化修饰、抗氧化活性、预防胃溃疡活性及抗肿瘤活性进行了研究，主要结果如下：
　　粒毛盘菌YM120胞外多糖及胞外蛋白多糖均具有显著的体外抗氧化活性，且具有剂量-效应关系。胞外多糖对O2ˉ·和DPPH自由基的清除作用强于胞外蛋白多糖，而其还原力、对·OH和亚硝酸盐的清除作用均略低于胞外蛋白多糖。
　　粒毛盘菌YM120胞外多糖（LEP）经脱蛋白、脱色等初步纯化后，采用CelluloseDEAE-52柱和SepharoseCL-6B柱进行分级分离得单一组分LEP-1a。高效凝胶渗透色谱检测其为均一多糖，分子量为32,237Da；全水解、乙酰化后经GC-MS分析，表明LEP-1a的单糖组分为葡萄糖；高碘酸氧化-Smith降解、红外光谱、1HNMR谱及13CNMR谱等分析结果表明LEP-1a是一种具有β-D-构型的吡喃型葡聚糖，主链和支链均由1→3键连接组成，支链以1→6键连接在主链葡萄糖的C6位。
　　LEP-1a灌胃小鼠2周后，以无水乙醇诱导建立急性胃溃疡模型，结果表明，低、中、高剂量多糖组小鼠的胃溃疡出血面积均不同程度低于模型小鼠胃溃疡的出血面积，其中高剂量多糖使小鼠的胃溃疡指数由46.3%降低到4.43%。各剂量多糖组小鼠的胃蛋白酶活性、胃液量及胃液总酸度均明显低于模型对照组（且呈明显的量效关系），同时，小鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性明显提高，丙二醛（MDA）含量明显降低。结果表明LEP-1a对无水乙醇型胃溃疡具有显著的预防作用。
　　LEP-1a经磷酸化反应进行修饰得磷酸化多糖PLEP-1a，其磷酸根含量为6.39%。红外、13CNMR及31PNMR结果显示该多糖原有的基本结构未发生变化，–H2PO3基团连接在LEP-1a支链的C6上。抗肿瘤实验结果表明，剂量为100mg/kg和400mg/kg的LEP-1a均能显著提高S180肉瘤小鼠的摄食量、体重、抑瘤率和胸腺指数，提高小鼠血清中SOD酶活、IL-2及TNF-α的水平，表明LEP-1a具有明显的抗肿瘤活性。而相比于LEP-1a，相同浓度的PLEP-1a对小鼠S180肉瘤的抑制作用显著增强，表明多糖的磷酸化修饰可以提高其生物学活性。

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第一章 绪论

1.1 真菌多糖的发酵

1.2 真菌多糖的提取纯化

1.3 真菌多糖的结构解析

1.4 真菌多糖的分子修饰

1.5 真菌多糖的生物活性

1.6 粒毛盘菌多糖的研究概况

1.7 本课题研究的内容与意义

第二章 粒毛盘菌YM120胞外多糖与蛋白多糖的制备及其抗氧化活性

2.1 引言

2.2 材料和方法

2.3 结果与分析

2.4 本章小结

第三章 粒毛盘菌YM120胞外多糖的结构特征及其对无水乙醇型胃溃疡的预防作用

3.1 引言

3.2 材料与方法

3.3 结果与讨论

3.4本章小结

第四章 粒毛盘菌YM120胞外多糖的磷酸化修饰及抗肿瘤活性

4.1 引言

4.2 材料与方法

4.3 结果与讨论

4.4 本章小结

第五章 结论与展望

5.1 结论

5.2 创新点

5.3 展望

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文及申报的专利