Mito-CRISPR/Cas9系统的构建及线粒体靶向递送功能验证

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第一章 文献综述

1.1基因编辑技术的发展

1.1.1传统基因编辑技术的发展

1.1.2人工核酸内切酶相关技术的发展

1.2线粒体DNA编辑的研究进展

1.2.1线粒体DNA编辑在疾病治疗中的应用

1.2.2线粒体DNA编辑在动植物育种中的应用

1.3 本研究的目的和意义

第二章 线粒体基因组打靶载体的构建

2.1 实验材料

2.1.1 实验菌株和质粒

2.1.2主要实验试剂及仪器

2.1.3实验用引物

2.2试验方法

2.2.1sgRNA靶向线粒体相关载体构建

2.2.2 Cas9蛋白靶向线粒体相关载体构建

2.3 实验结果

2.3.1 sgRNA靶向线粒体相关载体构建

2.3.2 Cas9蛋白靶向线粒体相关载体构建

2.4讨论

2.5小结

第三章 sgRNA 定位检测

3.1 实验材料

3.1.1 实验菌株和质粒

3.1.2主要实验试剂及仪器

3.1.3实验用引物

3.2 实验方法

3.2.1 HEK293T细胞系的培养

3.2.2细胞转染

3.2.3 细胞线粒体RNA的提取

3.2.4 细胞线粒体RNA的半定量

3.3.1质粒成功转入细胞

3.3.2 sgRNA成功进入线粒体

3.4讨论

3.5小结

第四章 蛋白定位检测

4.1 实验材料

4.1.1试验菌种、质粒及细胞系

4.1.2 主要试剂及仪器

4.2.1 细胞培养，转染

4.2.2 细胞核DAPI染色

4.2.3 细胞线粒体蛋白的提取

4.2.4 细胞核蛋白和浆蛋白的提取

4.2.5 线粒体蛋白、浆蛋白和核蛋白SDS-PAGE电泳

4.2.6线粒体蛋白、浆蛋白和核蛋白进行Western Blot

4.3实验结果

4.3.1 GFP组载体成功转入细胞

4.3.2 GFP蛋白定位检测

4.4讨论

4.5小结

结论与创新点

参考文献

致 谢

个人简历