油茶籽饼粕多糖的提取分离、结构分析及其降血糖活性研究

摘要

油茶籽粕为油茶籽榨取茶油后的饼粕，含有20％-30％的多糖类物质。多糖具有抗氧化、增强免疫、降血糖及抗感染等多种生物活性。开发利用油茶籽粕多糖具有理论价值和实践意义。本文以油茶籽饼粕为原料，试验研究酶法辅助传统热水浸提提取油茶籽饼粕多糖的工艺，并对油茶籽饼粕多糖的结构特征、基本理化性质及其降血糖活性进行了研究。主要研究结果如下:
　　1、响应面法优化了油茶籽饼粕多糖提取过程中的酶解工艺，最佳酶解工艺条件为:酶解温度40℃、酶解时间120min、中性蛋白酶添加量2.0％;正交试验设计优化出油茶籽饼粕多糖提取的最佳工艺条件为:提取温度80℃、料液比1∶20(g/mL)、提取时间60min，在此工艺条件下油茶籽饼粕多糖平均得率为18.48％。
　　2、对油茶饼粕粗多糖进行进一步分离纯化。依次经过Sevage法脱蛋白、双氧水脱色、纤维素DEAE-52柱层析分离，用0.4mol/L NaCl溶液洗脱得到了一种多糖组分SCFP，通过高效液相色谱色谱法分析，其为均一片段，分子量约为2.0121×107Da。红外光谱分析表明SCFP具有多糖类物质的特征吸收峰，紫外光谱分析表明SCFP不含蛋白质和核酸。SCFP乙酰化后进行GC分析，结果表明SCFP主要由鼠李糖、木糖和葡萄糖组成，摩尔比为11.19∶17.06∶5.81。
　　3、研究了油茶籽饼粕多糖对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病小鼠的降血糖作用，糖尿病模型小鼠灌胃剂量分别为50、100和200mg/(kg·d)的油茶籽饼粕多糖，阳性对照组则灌胃剂量为10mg/(kg·d)的格列本脲，试验周期为4周。试验结果表明纯化前后的油茶籽饼粕多糖均有效缓解糖尿病小鼠的“三多一少”症状，显著降低了糖尿病小鼠的血糖水平，并呈现剂量依赖性;显著降低了糖尿病小鼠肝脏、肾脏的MDA水平，同时有效提高了糖尿病小鼠肝脏、肾脏的GSH-PX、CAT及SOD活性。这些结果表明油茶籽饼粕多糖的降血糖作用机制可能是通过提高机体抗氧化酶活性，清除自由基以解除自由基对机体的损害来实现的。

目录

声明

致谢

摘要

第一章 绪论

1．1 植物多糖的研究进展

1．1．1 植物多糖的提取分离方法

1．1．2 植物多糖的纯化

1．1．3 植物多糖的结构分析方法

1．2 植物多糖的活性

1．2．1 抗氧化

1．2．2 降血糖

1．2．3 降血脂

1．2．4 抗肿瘤

1．2．5 抗炎

1．2．6 免疫调节

1．3 油茶籽饼粕多糖的研究进展

1．3．1 油茶籽饼粕概述

1．3．2 油茶籽饼粕中的主要活性成分

1．3．3 油茶籽饼粕多糖的研究进展

1．4 本课题研究的内容与意义

第二章 酶法辅助热水浸提油茶籽饼粕多糖

2．1 试验材料与仪器

2．1．1 试验材料

2．1．2 主要试剂

2．1．3 实验仪器设备

2．2 试验方法

2．2．1 葡萄糖标准曲线的绘制

2．2．2 油茶籽饼粕多糖的制备

2．2．3 油茶籽饼粕多糖得率计算

2．2．4 酶的种类对油茶饼粕多糖得率的影响

2．2．5 酶解单因素试验

2．2．6 酶解响应面试验设计

2．2．7 多糖提取单因素试验

2．2．8 多糖提取正交试验设计

2．3 结果与分析

2．3．1 葡萄糖标准曲线的绘制

2．3．2 酶的种类对油茶饼粕多糖得率的影响

2．3．3 酶解单因素试验结果与分析

2．3．4 响应面试验方案及结果分析

2．3．5 多糖提取单因素试验及结果分析

2．3．6 多糖提取正交试验设计方案及结果分析

2．4 本章小结

第三章 油茶籽饼粕多糖的纯化及结构分析

3．1 试验材料与方法

3．1．1 试验材料

3．1．2 主要试剂

2．1．3 实验仪器设备

3．2 试验方法

3．2．1 蛋白质含量的测定-考马斯亮蓝法

3．2．2 油茶籽饼粕多糖的纯化

3．2．3 油茶籽饼粕多糖的紫外光谱分析

3．2．4 油茶籽饼粕多糖的红外光谱分析

3．2．5 油茶籽饼粕多糖相对分子量的测定

3．2．6 油茶籽饼粕多糖的单糖组成分析

3．3 结果与分析

3．3．1 多糖中蛋白质含量测定

3．2．2 油茶籽饼粕多糖的纯化

3．3．3 油茶籽饼粕多糖的紫外光谱分析

3．3．4 油茶籽饼粕多糖的红外光谱分析

3．3．5 油茶籽饼粕多糖的分子量测定

3．3．6 油茶籽饼粕多糖的单糖组成分析

3．4 本章小结

第四章 油茶籽饼粕多糖的降血糖活性研究

4．1 试验材料与仪器

4．1．1 试验动物与材料

4．1．2 试验药品与试剂

4．1．3 试验仪器设备

4．2 实验方法

4．2．1 高血糖小鼠模型的建立

4．2．2 成模小鼠的分组及给药

4．2．3 小鼠一般状况的观察

4．2．4 小鼠体重测定

4．2．5 小鼠空腹血糖值的测定

4．2．6 小鼠各脏器指数的测定

4．2．7 小鼠肝脏、肾脏组织中MDA含量及抗氧化酶活性的测定

4．2．8 数据分析

4．3 结果与分析

4．3．1 小鼠一般状况的观察

4．3．2 小鼠体重测定

4．3．3 小鼠空腹血糖值的测定

4．3．4 小鼠各脏器指数的测定

4．3．5 小鼠肝脏、肾脏中MDA含量和抗氧化酶测定

4．3 本章小结

第五章 结论与展望

5．1 结论

5．2 展望

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文及专利