姜精油的纯化与抗炎活性研究

摘要

本论文主要研究姜精油的提取、纯化工艺，通过工艺优化得到较优的工艺条件。建立动物皮肤炎症模型，研究姜精油的抗炎活性，并在分子水平上研究姜精油抗变应性接触性皮炎的作用机理。主要研究内容与结果如下:
　　1、姜精油的提取。采用超临界二氧化碳萃取法萃取姜精油，通过单因素试验和响应面分析得到优化的提取条件。条件为:萃取温度40.85℃、萃取压力22.59MPa、萃取时间4.23h，在此条件下姜精油的得率为1.2314％。实际操作时将各参数调整为:萃取温度41℃、萃取压力22.6MPa、萃取时间4.23h，姜精油的实际得率为1.23±0.0043％，纯度为16.01±0.31％。
　　2、姜精油的纯化。通过静态吸附试验从D101、AB-8、D1300和DA201四种大孔吸附树脂中，选择AB-8型大孔树脂对萃取后姜精油进行动态吸附与解吸试验。考察进样液浓度、流速及解吸液浓度、流速四个因素，得到纯化的最佳条件为:进样液浓度3mg/mL，进样流速3mL/min，以100％乙醇为解吸液，解吸液用量为7BV，以0.5mL/min的流速解吸。在此条件下得到的姜精油纯度由16.01％提高到了46.60％。表明AB-8型大孔树脂对姜精油具有良好的纯化效果。
　　3、姜精油的抗炎活性研究。采用二甲苯致小鼠耳部肿胀、角叉菜胶致小鼠足趾肿胀、二甲苯致小鼠皮肤毛细血管通透性改变及小鼠变应性接触性皮炎试验来评价姜精油的外用抗皮炎活性。试验结果表明，姜精油可降低小鼠的耳部和足趾肿胀，抑制皮肤毛细血管通透性增高。在变应性接触性皮炎试验中，姜精油能够明显抑制小鼠耳廓肿胀度及肿胀率，改善皮损情况。病理组织学观察可知，姜精油能够降低炎症细胞浸润、细胞水肿及血管扩张，表明姜精油对急性皮肤炎症和慢性炎症变应性接触性皮炎均有良好的抗皮炎效果，具有明显的皮炎抑制作用。
　　4、姜精油对变应性接触性皮炎的抗炎机理研究。在变应性接触性皮炎的发病过程中，多种细胞因子发挥了重要作用。本文研究了Toll样受体2（TLR-2）、Toll样受体4(TLR-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素8(IL-8)和白细胞介素4（IL-4）七种细胞因子在小鼠变应性接触性皮炎中的作用，以及姜精油的干预作用。通过RT-PCR研究结果发现，姜精油可以下调小鼠耳部组织及脾组织中TLR-2、TLR-4、TNF-α、IFN-γ、IL-1β和IL-8基因的表达量，上调IL-4基因的表达量。表明姜精油的抗皮炎机理可能与调节相关炎性细胞因子的表达有关。
　　综上所述，采用超临界二氧化碳萃取法结合AB-8型大孔吸附树脂可以对姜精油达到良好的提取纯化效果。姜精油具有明显的抗炎活性，其抗变应性接触性皮炎机理与调节相关炎性细胞因子的基因表达有关。

目录

声明

致谢

摘要

第一章 绪论

1．1 研究背景

1．2 姜精油

1．2．1 姜精油的提取方法研究

1．2．2 姜精油的纯化方法研究

1．2．3 姜精油的生物活性研究

1．3 炎症

1．3．1 炎症简介

1．3．2 急性炎症

1．3．3 变应性接触性皮炎

1．4 研究意义及研究内容

1．4．1 研究意义

1．4．2 主要研究内容

第二章 姜精油的提取工艺研究

2．1 6-姜酚标准曲线的绘制

2．1．1 材料、试剂与仪器

2．1．2 试验方法

2．1．3 结果与分析

2．2 姜精油的提取工艺

2．2．1 材料、试剂与仪器

2．2．2 试验方法

2．2．3 结果与分析

2．2．4 小结与讨论

第三章 姜精油的纯化工艺研究

3．1 材料、试剂与仪器

3．1．1 试验材料

3．1．2 试验试剂

3．1．3 试验仪器

3．2 试验方法

3．2．1 树脂预处理

3．2．2 静态吸附与解吸试验

3．2．3 动态吸附与解吸试验

3．2．4 验证试验

3．3 结果与分析

3．3．1 静态吸附与解吸试验

3．3．2 动态吸附与解吸试验

3．3．3 验证试验

3．4 小结与讨论

第四章 姜精油的抗炎活性研究

4．1 试验材料

4．1．1 试验动物

4．1．2 试验试剂

4．1．3 试验仪器

4．1．4 试剂配制

4．2 试验方法

4．2．1 姜精油对二甲苯致小鼠耳部肿胀的影响

4．2．2 姜精油对角叉菜胶致小鼠足趾肿胀的影响

4．2．3 姜精油对小鼠毛细血管通透性改变的影响

4．2．4 姜精油对小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的影响

4．2．5 统计方法

4．3 结果与分析

4．3．1 姜精油对二甲苯致小鼠耳部肿胀的影响

4．3．2 姜精油对角叉菜胶致小鼠足趾肿胀的影响

4．3．3 姜精油对小鼠毛细血管通透性改变的影响

4．3．4 姜精油对小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的影响

4．4 小结与讨论

第五章 姜精油对变应性接触性皮炎(ACD)的抗炎机理研究

5．1 材料、试剂与仪器

5．1．1 试验材料

5．1．2 试验试剂

5．1．3 试验仪器

5．1．4 引物设计

5．2 试验方法

5．2．1 RT-PCR法测定相关基因的表达

5．2．2 统计方法

5．3 结果与分析

5．3．1 Toll样受体(toll-like receptor，TLR)

5．3．2 肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha，TNF-α)基因

5．3．3 干扰素γ(interferon gamma，IFN-γ)基因

5．3．4 白细胞介素(interleukin，IL)

5．4 结果与分析

第六章 结论与展望

6．1 主要结论

6．2 展望

参考文献

攻读硕士期间发表的论文