川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤后GFAP表达的影响

摘要

目的:　　观察大鼠急性脊髓损伤后GFAP（胶质纤维酸性蛋白，glial fibrillary acidic protein)在受损脊髓的不同时间点的表达变化，分析GFAP在脊髓内源性神经干细胞的增殖和分化过程中的作用机制,明确川芎嗪治疗脊髓损伤的分子机制。　　方法:　　将SD大鼠随机分为正常对照组(A组36只)、假手术组(B组36只)、模型组(C组36只),川芎嗪干预组(D组36只)。用改良Allen's法建立大鼠急性脊髓损伤模型。D组在伤后每日2％盐酸川芎嗪注射液腹腔注射，200 mg/kg（首次给药在术后30 min)， A、B、C三组在同一时间给予等量生理盐水。共10天。于造模后第8小时、1天、3天、7天、14天、28天进行斜板实验、BBB评分神经功能行为学评价。于造模后第8小时、1天、3天、7天、14天、28天每组分别处死6只大鼠,以脊髓受损处为中心上下长各约5mm取大鼠的脊髓进行HE染色、尼氏染色、免疫组化检测。用 HE染色和尼氏染色观察脊髓的病理形态学变化,用免疫组化法检测代表脊髓内源性神经干细胞的 Brdu+细胞和Nestin+细胞的表达,及GFAP在大鼠脊髓表达变化情况。对检测结果进行统计分析,并对Brdu+和Nestin+细胞、GFAP在脊髓中的表达进行相关性分析。　　结果:　　1、大鼠造模损伤脊髓后,C组、D组大鼠的后肢运动功能显著降低,脊髓功能严重损伤,大鼠在斜板上维持的最大角度与BBB评分均明显降低,与 A组比较有显著性差异（P<0.01)；D组大鼠治疗后在斜板上维持的最大角度呈明显上升趋势,在第14天、28天与模型对照组对比有显著差异(P<0.05)。D组大鼠在治疗后BBB评分逐渐增加,在第3天、14天、28天与C组比较有显著差异(P<0.01)；　　2、通过大鼠脊髓组织切片进行 HE染色和尼氏染色观察各组大鼠脊髓组织的病理学变化。脊髓损伤后可见受损脊髓水肿,局灶性出血,神经元胞体皱缩、核固缩,尼氏小体开始減少和消失,神经元变性,第3天后出现脊髓水肿加重,局灶性出血范围增大,炎性细胞浸润明显,灰质部分组织溶解形成空泡；至第7天、14天坏死范围进一步扩大,炎症水肿逐渐减轻,至第28天,坏死区周围瘢痕增生,向坏死区填充。川芎嗪能明显减轻脊髓损伤后水肿、炎性细胞浸润及出血程度,保护神经细胞，促进脊髓组织修复；　　3、脊髓损伤后,Brdu+细胞被激活,在脊髓中的表达明显增多,在脊髓白质、灰质及中央管室管膜区均有表达。在第7天达到峰值,随后逐渐减少。川芎嗪能明显促进Brdu+细胞增殖,在损伤后第7天、14天、28天，与C组比较有显著差异(P<0.01)。川芎嗪能显著促进Nestin+细胞表达，在第7天达到峰值,在损伤后第7天、14天、28天与C组比较有显著性差异(P<0.01)；川芎嗪能显著促进GFAP+细胞表达,在第7天达到峰值,在损伤后第7天、14天、28天与C组比较有显著性差异(P<0.01)。　　4、经对GFAP表达、Nestin+细胞和 Brdu+细胞在脊髓中的表达数进行相关性分析,GFAP表达与Nestin+细胞表达呈正相关关系。　　结论:　　1、GFAP的表达与脊髓内源性干细胞的增殖分化呈正相关趋势；　　2、川芎嗪能够对脊髓损伤后内源性神经干细胞增殖分化有促进作用；　　3、川芎嗪能够促进脊髓损伤后GFAP的表达。

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前言

第一部分材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3统计学分析

第二部分 实验结果

1神经功能及行为学评价

2 HE染色结果

3 尼氏染色结果

4 免疫组织化学法检测BrdU+、Nestin+和GFAP阳性细胞结果

第三部分 讨 论

1急性脊隨损伤病因病机的中医角度的认识

2改良Allen’s急性脊髓损伤模型的评估

3 星形胶质细胞细胞骨架及生物学功能

4 急性脊髓损伤后内源性脊髓神经干细胞增殖分化

5脊髓微环境对内源性脊髓神经干细胞增殖与分化的影响

6川芎嗪对急性脊髓损伤的修复过程中的影响

7 纤维酸性星形胶质细胞标志物GFAP与神经干细胞

第四部分 结论

第五部分创新点

参考文献

附图

缩略词表

综述:星形胶质细胞中间丝蛋白GFAP与神经干细胞

致谢

研究生在校期间发表的论文及科研情况