蛇六谷石油醚提取物调控SGC-7901细胞周期的分子机制及其对MAPK信号通路的影响

摘要

目的：研究中药蛇六谷经系统溶剂法初步提取分离后，所得到的蛇六谷石油醚提取物阻滞体外培养的人胃癌SGC-7901细胞周期于G0/G1期的分子机理，以及对MAPK信号转导通路（ERK、JNK、P38通路）的影响。　　方法：采用系统溶剂法，以95％乙醇回流提取蛇六谷，减压浓缩后，以石油醚多次萃取活性成分，得到蛇六谷石油醚提取物；以光学显微镜直接观察细胞形态法，了解不同浓度梯度蛇六谷石油醚提取物对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响，并选取有效浓度梯度；以Western Blot蛋白印迹法检测周期调控分子Cyclin D1、CDK4以及MAPK信号转导通路家族ERK、p-ERK、JNK、p-JNK、P38、p-P38的蛋白表达水平。　　结果：（1）用光学显微镜直接观察蛇六谷石油醚提取物作用于人胃癌 SGC-7901细胞24 h后细胞形态变化，发现随着药物浓度的增加，细胞逐渐皱缩，细胞内颗粒增多，细胞膜破裂，细胞逐步裂解，且这种作用呈现明显的剂量依赖性；（2）蛇六谷石油醚提取物抑制人胃癌SGC-7901细胞Cyclin D1、CDK4的表达，并随着药物浓度的增加，表达量呈现剂量－效应曲线下降；（3）蛇六谷石油醚提取物对人胃癌SGC-7901细胞ERK、JNK、P38蛋白的表达无影响，但激活ERK、JNK、P38磷酸化水平，即上调它们的活化形式（p-ERK、p-JNK、p-P38）的表达水平，并且随着浓度的增加，磷酸化水平也随之上升，尤其高浓度组的表达量急剧增加。　　结论：（1）蛇六谷石油醚提取物具有抑制人胃癌 SGC-7901细胞增殖的作用，且其作用呈现明显的剂量依赖性；（2）蛇六谷石油醚提取物通过下调周期调控分子Cyclin D1、CDK4的表达，阻滞SGC-7901细胞于G0/G1期；（3）蛇六谷石油醚提取物对SGC-7901细胞内MAPK信号转导通路家族的ERK、JNK、P38蛋白表达无影响，但激活ERK、JNK、P38磷酸化水平，即激活MAPK信号转导通路。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

前言

一、 材料与方法

(一) 材料

1. 实验室

2. 实验细胞株

3. 实验仪器

4. 实验材料

5. 实验药品

6. 实验试剂

7. 主要试剂的配制

(二) 方法

1. 蛇六谷石油醚提取物的制备

2. 人胃癌SGC-7901细胞的复苏、培养与传代、冻存

3. 药物的配制

4. 细胞增殖抑制实验

5. Western Blot蛋白印迹法检测蛋白表达水平

6. 数据统计分析

二、 结果

(一) 蛇六谷石油醚提取物对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

(二) 周期调控蛋白的表达情况

1. Cyclin D1的表达情况

2. CDK4的表达情况

(三) MAPK信号转导通路的蛋白表达情况

1. ERK、p-ERK的表达情况

2. JNK、p-JNK的表达情况

3. P38、p-P38的表达情况

三、 分析与讨论

(一) 蛇六谷石油醚提取物对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用

(二) 蛇六谷石油醚提取物调控胃癌SGC-7901细胞周期分子的机理分析

(三) 蛇六谷石油醚提取物对SGC-7901细胞中MAPK信号转导通路的调节机理

1. 蛇六谷石油醚提取物对SGC-7901细胞中ERK通路的调节作用

2. 蛇六谷石油醚提取物对SGC-7901细胞中JNK通路的调节作用

3. 蛇六谷石油醚提取物对SGC-7901细胞中P38通路的调节作用

4. 蛇六谷石油醚提取物对SGC-7901细胞中MAPK通路调节作用的小结

四、 小结

结论

参考文献

致谢

附：文献综述 MAPK信号传导通路在胃癌中的研究现状