龙血生肌膏对大鼠失神经支配创面神经肽P物质分泌和神经纤维再生影响的实验研究

摘要

目的：　　观察龙血生肌膏对大鼠失神经支配创面愈合的作用，并通过测定神经肽 P物质和神经纤维的含量，探讨龙血生肌膏促进失神经支配创面愈合的作用机理。　　方法：　　清洁级健康SD雄性成年大鼠168只，体重220～250g。完全随机法分成4组即龙血生肌膏组（A组）、生肌愈皮膏组（B组）、失神经创面组（C组）、正常创面组（D组）。将A、B、C三组大鼠的T11、T12、T13、L1、L2脊神经根离断，在全部大鼠背侧做一直径为1.5cm的圆形深度达肌膜下2mm的组织缺损深创面。A组创面以龙血生肌膏外用，每个创面0.1g；B组创面以生肌愈皮膏外用，每个创面0.1g；C组、D组创面均以凡士林外用，创面以纱布包扎，每日定时换药1次，于造模后1天、4天、7天、11天、15天、21天、28天七个时间点观察记录创面的愈合情况、计算创面面积和完全愈合时间并取材，制备组织切片进行HE常规组织学染色、GENMED神经纤维银染色和P物质的免疫组织化学染色。光镜下观察 HE染色各组创面组织形态学变化，成纤维细胞、胶原纤维形态及数量变化；光镜下观察 GENMED还原银染色各组神经纤维再生变化；光镜下观察免疫组化染色P物质的表达变化；对创面中成纤维细胞、再生神经纤维进行人工计数；用图像分析仪及分析软件分析各组创面胶原纤维面积，SP阳性表达面积。所得结果用SPSS17.0统计软件进行统计学处理。　　结果：　　①创伤后的早期，龙血生肌膏组创面湿润，渗出较多，药物呈液体状均匀覆盖于创面上。其他组创面干燥，渗出少；愈合过程中，肉芽组织增生和再上皮化程度，龙血组和生肌组无明显差别，均优于失神经创面组，同时正常创面组愈合情况要优于失神经创面组。　　②创面愈合时间比较：龙血生肌膏组和生肌愈皮膏组的创面愈合时间无明显差别，均比非药物组（C组和D组）缩短，差异有统计学意义（P<0.05)，失神经创面组愈合时间比正常创面组明显延长，差异有统计学意义（P<0.05)。　　③创面愈合率比较：除去第一天创面未见明显愈合外，其他时间点龙血生肌膏组和生肌愈皮膏组的创面愈合率无明显差异，均高于非药物组，差异有统计学意义（P<0.05)，失神经创面组愈合率低于正常创面组，差异有统计学意义（P<0.05)。　　④HE形态学观察结果比较：HE染色结果显示，创面愈合过程中，龙血生肌膏组创面的炎细胞浸润、肉芽组织增生和成纤维细胞的数量均优于非药物组，与生肌愈皮膏组无明显差异。　　⑤创面神经纤维的再生比较：龙血生肌膏组和生肌愈皮膏组在第4、7、11天神经纤维大量再生，第15天达到高峰，与失神经创面组比较，差异有统计学意义。　　⑥创面P物质(SP)的表达比较:从SP表达的动态趋势来看龙血生肌膏和生肌愈皮膏组基本一致，较其他两组提前达到高峰。从SP表达量上观察，龙血生肌膏组明显高于其他3组。　　结论：　　第一，龙血生肌膏能促进失神经支配创面的愈合速度；第二，龙血生肌膏能促进失神经支配创面愈合过程中神经肽P物质的分泌和神经纤维的再生，龙血生肌膏的促愈合作用机理可能与促进神经肽P物质分泌和神经纤维再生有关。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

前言

一、 实验材料与方法

(一)实验动物

(二)实验药品

(三)实验试剂

(四)实验器材

(五)实验方法

(六)统计方法

二、 结果

(一)大体观察

(二)创面愈合时间比较

(三)创面愈合率比较

(四) HE常规组织学染色观察结果

(五) GENMED神经纤维银染色结果

(六) SP免疫组织化学染色结果

三、 分析与讨论

(一)祖国医学对难愈性创面愈合修复的认识

(二)龙血生肌膏组方解析

(三)现代医学对难愈性创面愈合修复的认识

(四)失神经支配深创面模型的建立

(五)实验结果分析

结论

参考文献

附图