无机砷对人肝星状细胞自噬水平影响的研究

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研究内容与方法

1 材料

1.1 研究材料

1.2 实验相关试剂的配制

2 研究方法

2.1 构建稳定感染RFP-GFP-LC3慢病毒的LX-2细胞株

2.2 CCK8法检测细胞活力的原理

2.3 LX-2细胞生长曲线的绘制

2.4 LX-2细胞染毒方式及分组

2.5 流式细胞术检测LX-2细胞早期凋亡率

2.6 流式细胞术检测人 LX-2细胞周期

2.7 实时荧光定量PCR(RealTime PCR，RT-PCR)检测

2.8 western-blot检测

2.9 激光共聚焦拍摄无机砷、三甲基腺嘌呤+无机砷干预慢病毒感染后LX-2细胞的GFP、RFP的荧光表达情况

3 统计学分析

结 果

1 LX-2细胞形态的观察

2 LX-2细胞生长曲线

3.1 确定嘌呤霉素的筛选浓度

3.2 稳定感染慢病毒细胞株的建立

3.3 自噬的诱导

4 亚砷酸钠?砷酸钠染毒细胞IC50的测定及分组

5 无机砷对LX-2细胞形态的影响

6.1 亚砷酸钠对慢病毒感染后LX-2细胞活性的影响

6.2 砷酸钠对慢病毒感染后LX-2细胞活性的影响

7 无机砷对慢病毒感染后LX-2细胞早期凋亡率的影响

8 无机砷对慢病毒感染后LX-2细胞细胞周期的影响

9 无机砷对慢病毒感染后 LX-2 细胞 LC3、Beclin-1、ATG4、ATG5、ATG8、BCL-2、BCL-XL mRNA表达水平的影响

9.1 无机砷对慢病毒感染后 LX-2 细胞自噬相关基因 LC3、Beclin-1、ATG4、ATG5、ATG8mRNA表达水平的影响

9.2 无机砷对慢病毒感染后 LX-2 细胞凋亡相关基因 BCL-2、BCL-XL mRNA表达水平的影响

10 无机砷对慢病毒感染后 LX-2 细胞 LC3、Beclin-1、SQSTM-1/P62、TMEM-49、mTOR、BCL-2、BCL-XL、α-SMA 蛋白表达的影响

11 自噬抑制剂三甲基腺嘌呤联合无机砷对慢病毒感染后LX-2细胞自噬情况的影响

讨 论

1 稳定感染RFP-GFP-LC3慢病毒载体的LX-2细胞株的建立

2 无机砷对LX-2细胞自噬水平的影响

3 三甲基腺嘌呤对无机砷诱导LX-2细胞自噬的影响

小 结

致 谢

参考文献

综述:砷致肝损伤与细胞自噬的研究进展

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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