多种柱层析精致纯化藻蓝蛋白的研究

摘要

近年来，巢湖水体富营养化仍然严重，蓝藻时有爆发，如何将水华爆发产生的蓝藻资源化利用是一个重要课题。因为蓝藻本身含有很多有用物质，如叶绿素，类胡萝卜素、胞外多糖和藻蛋白等物质。从蓝藻中提取藻蛋白尤其是藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白是研究热点，因为很多研究表明藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白抗氧化、抗炎性、抗癌性、抗衰老性、抑菌、增强机体免疫力、免疫荧光性等生理活性，并且被广泛应用于食品、化妆品、医药等领域。因此，本论文以巢湖蓝藻为材料，首先通过优化二步盐析法提取得到藻蓝液体，然后优化柱层析法条件纯化获得高纯度的藻胆蛋白。主要研究内容摘要如下:
　　1.两步盐析结合凝胶层析提取与纯化藻蓝蛋白。针对凝胶柱层析填料的类型、洗脱液的种类、洗脱液pH、加样流速等条件分别作了探究，经实验研究，最优条件为:洗脱液为磷酸盐洗脱液、洗脱液的pH为7.0和流速为1.5cm/min。
　　2.两步盐析结合离子交换层析提取与纯化藻蓝蛋白。针对离子交换柱层析填料的类型、洗脱液pH、加样浓度、加样速度、洗脱液中盐浓度等条件分别作了探究，经实验研究，最优条件为:选取填料为纤维素A-500、洗脱液pH为7.0、加样浓度为1-2mg/L、加样速度为2cm/mm和洗脱液NaCl浓度为0.25mol/L。
　　3.两步盐析结合亲和层析提取与纯化藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白。针对亲和柱层析填料的类型、洗脱液pH、加样浓度、加样速度、洗脱液的浓度分别作了探究，经实验研究，最优条件为:选取的填料为羟基磷灰石，洗脱液pH为6.5、加样浓度为1.6-2.0mg/L、加样速度为2cm/mm和洗脱液PBS浓度为40mmol/L和60mol/L。

目录

声明

致谢

摘要

第一章 绪论

1．1 研究背景

1．1．1 巢湖地点位置

1．1．2 巢湖流域概况

1．1．3 巢湖富营养化现状分析

1．1．4 巢湖水华蓝藻资源化方向现状

1．2 藻胆蛋白纯化的国内外研究现状

1．2．1 藻胆蛋白纯化相关概念

1．2．2 藻胆蛋白纯化的国内外研究现状

1．3 课题的提出

1．3．1 选题依据

1．3．2 研究内容

第二章 凝胶层析精致纯化巢湖蓝藻获得藻蓝蛋白的探究

2．1 引言

2．2 实验部分

2．2．1 实验材料与仪器

2．2．2 实验步骤

2．3 分析方法

2．4 实验结果与讨论

2．4．1 一步盐析单因素实验

2．4．2 二步盐析单因素实验

2．4．3 凝胶柱层析填料的选择

2．4．4 洗脱液的种类

2．4．5 洗脱液的pH

2．4．6 洗脱液的流速

2．4．7 验证实验结果

2．5 本章小结

第三章 离子交换层析精致纯化巢湖蓝藻获得藻蓝蛋白的探究

3．1 引言

3．2．1 实验材料与仪器

3．2．2 实验步骤

3．3 实验结果与讨论

3．3．2 洗脱液pH对Cellfine A-500纯化藻蓝蛋白的影响

3．3．3 加样浓度对Cellfine A-500纯化藻蓝蛋白的影响

3．3．4 加样速度对Cellfine A-500纯化藻蓝蛋白的影响

3．3．5 洗脱液的盐浓度对Cellfine A-500纯化藻蓝蛋白的影响

3．3．6 验证实验结果

3．4 本章小结

第四章 亲和层析精致纯化巢湖蓝藻获得藻胆蛋白的探究

4．1 引言

4．2 实验部分

4．2．1 主要实验试剂及器材

4．2．2 实验步骤

4．3 结果分析

4．3．1 亲和层析填料的选择

4．3．2 洗脱液pH对亲和层析纯化藻胆蛋白的影响

4．3．3 加样浓度对羟基磷灰石纯化藻胆蛋白的影响

4．3．4 洗脱液速度对羟基磷灰石纯化藻胆蛋白的影响

4．3．5 洗脱液的浓度(PBS)对羟基磷灰石纯化藻胆蛋白的影响

4．3．6 验证实验结果

4．3．7 最优条件下，藻蓝蛋白提纯的光谱扫描的结果

4．3．8 柱层析羟基磷灰石纯化藻蓝蛋白的洗脱曲线

4．4 本章小结

第五章 结论与展望

5．1 结论

5．2 展望

参考文献