四物汤单-合煎多指标化学成分对比研究

摘要

四物汤是源于《仙授理伤续断秘方》的经典方，由熟地黄、当归、白芍、川芎四味中药组成，为补血、活血、调经的代表方，是治疗妇科病症中运用最广泛的方剂之一，被誉为“妇科圣方”，一直沿用，至今不衰。历代医家以四物汤为基础方，根据具体的病症加味形成了大量的衍生方，比较著名的有：桃红四物汤、圣愈汤、芩连四物汤等。目前虽有不少临床研究报告显示中药饮片合煎与单煎药效基本一致，但中药单煎与合煎是否存在差异以及这种差异是否会影响其临床疗效，一直是学术界研究争议的焦点，尽管有一些研究，但并未得到一致的结论。本论文以四物汤这一经典名方为例，以化学成分为重点，现代分析技术作支撑，定性与定量相结合的方法来比较四物汤单-合煎过程中可能存在的变化，从而为其药效研究及临床应用提供一定的参考。　　1、本文首先采用HPLC法建立了四物汤多指标成分含量测定的方法，以甲醇-0.3%甲酸水溶液为流动相；梯度洗脱；检测波长为280 nm；柱温为30℃；流速为1.0 mL·min-1。结果表明：5-HFM在1.51~24.10μg·mL-1，芍药内酯苷在5.23~83.60μg·mL-1，芍药苷在19.38~310.00μg·mL-1，阿魏酸在1.51~24.16μg·mL-1，毛蕊花糖苷在0.26~4.16μg·mL-1，洋川芎内酯I在2.00~32.00μg·mL-1，藁本内酯在1.50~24.00μg·mL-1范围内线性关系良好，相关系数均大于0.999；并且5-HFM、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、洋川芎内酯I、藁本内酯的平均回收率分别为99.27%，99.46%，95.89%，97.15%，99.17%，98.80%，96.89%，RSD值分别为1.31%，1.20%，2.90%，2.28%，3.63%，1.98%，2.87%，本法简便易行、准确、重现性良好。其次采用苯酚-浓硫酸法建立了四物汤多糖含量测定的方法，并且采用换算因子矫正了单纯以葡萄糖作标曲时引起的误差，同时考察了醇沉浓度、显色剂的用量等多糖提取与测定过程中的影响因素，对方法学的验证显示该方法简便快速、准确合理。本文通过建立四物汤多指标成分及多糖含量测定的方法为四物汤回流提取工艺的筛选及其单-合煎对比研究提供了一定的方法依据。　　2、本文对四物汤回流提取的单因素进行了考察，筛选出影响较大的因素。将影响较大的因素作为正交试验考察的因素。同时将评价指标与药效物质基础相结合，以有效组分多糖、阿魏酸、芍药苷及干膏率作为评价指标，采用层次分析法确定各指标的权重系数分别为0.4670、0.2777、0.1603、0.0951。通过综合评分优选出四物汤最佳水提条件为：浸泡30 min、10倍量水、提取2次、每次2.5 h。按照最优工艺条件，平行3次验证，结果表明该工艺条件稳定可行。本研究为四物汤单-合煎的对比研究提供了一定的工艺基础，同时为制备质量稳定、安全有效的复方制剂工艺提供了一定的参考。　　3、本文利用色谱及光谱技术与化学计量学相结合的方式对四物汤单-合煎进行定性判别分析。首先建立了四物汤HPLC指纹图谱方法，对四物汤合煎液与单煎混合液指纹图谱进行了整体比较，发现两者图谱基本一致，并无新的色谱峰产生，同时将10批合煎液及相应单煎混合液色谱数据导入中药色谱指纹图谱相似性评价系统，发现合煎液与单煎混合液相似度均大于0.9，两者相似度良好。同时将10批四物汤合煎液与单煎混合液中的25个共有峰，通过Simca-P软件对四物汤单-合煎进行主成分分析及偏最小二乘法-判别分析，经PCA及PLS-DA分析显示合煎液与单煎混合液均能被分成两类，25个共有峰中7个色谱峰单-合煎差异明显，可以作为单-合煎分类的标志性成分。其次建立了四物汤近红外光谱采集方法，通过采集四物汤合煎液与单煎混合液近红外光谱，并对光谱数据进行PLS-DA分析，发现四物汤合煎液与单煎混合液近红外光谱存在差异，能被分成两类。本实验利用色谱与光谱技术对四物汤单-合煎进行了整体比较，为其单-合煎定量对比奠定了实验基础。　　4、本文主要从一般理化指标和主要功效成分溶出量的角度对四物汤单-合煎进行了比较，首先对比了10批四物汤合煎液与单煎混合液主要理化指标pH及干膏率，显示合煎液与单煎混合液pH均在4.8左右，显弱酸性，干膏率在42%左右，经配对样本t检验统计显示四物汤合煎液与单煎混合液在pH及干膏率等理化指标上无显著性差异。其次对比了10批四物汤合煎液与单煎混合液中多糖的溶出量，经配对样本t检验统计显示两者无显著性差异。最后对比了四物汤合煎液、单煎混合液及单味药材单煎液中主要的7种有效成分5-HFM、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、洋川芎内酯I、藁本内酯的溶出量差异，显示四物汤合煎液与单煎混合液及单味药材单煎液间的化学成分溶出量存在差异，说明四物汤在加热煎煮过程中化学成分的溶出量并不是组方药味的简单叠加，而是存在着化学成分间的相互作用，从而产生促进其溶出或抑制溶出的变化，实验结果显示合煎液中芍药苷、芍药内酯苷、阿魏酸、藁本内酯的溶出量高于单煎混合液及相应单味药材单煎溶出量加和，且藁本内酯的溶出量变化最为显著，合煎液中的溶出量近于单煎混合液及单味药材单煎液溶出量加和的2倍，合煎液中洋川芎内酯I的溶出量低于单煎混合液及相应单味药材单煎溶出量加和，而5-HFM、毛蕊花糖苷的溶出量在单-合煎中差异无明显规律。单煎混合液中7种化学成分的溶出量几乎约等于相应单味药材单煎溶出量的加和，说明在混合过程中对成分的溶出量几乎无影响，从而进一步佐证了四物汤在单-合煎中溶出量的变化为加热煎煮过程中导致的。经t检验统计显示藁本内酯在四物汤合煎液与单煎混合液及单味药材单煎溶出量加和之间有极显著性差异，阿魏酸、洋川芎内酯I有显著性差异，而5-HFM、芍药苷、芍药内酯苷、毛蕊花糖苷无显著性差异。同时对藁本内酯合煎后溶出量显著增加的原因进行了考察，结果发现，当归-川芎药对配伍能促进藁本内酯的溶出，同时配伍熟地黄、白芍后也均有助于藁本内酯的溶出，四物汤组中藁本内酯溶出量最大，从而进一步证明了四物汤组方的合理性。本研究通过多指标定量研究，为四物汤单-合煎的药效研究及临床应用提供了一定的参考。

目录

声明

英文缩略词表

前言

实验一 四物汤多指标成分及多糖含量测定方法的建立

第一节 四物汤多指标成分含量测定方法的建立

第二节 四物汤多糖含量测定方法的建立

实验二 正交试验优选四物汤提取工艺的研究

2 实验结果

3 小结

实验三 色谱与光谱技术在四物汤单-合煎对比中的应用

第一节 四物汤单-合煎HPLC指纹图谱的研究

第二节 四物汤单-合煎近红外光谱的研究

实验四 四物汤单煎与合煎多指标定量对比研究

第一节 四物汤单-合煎理化指标及化学成分溶出量的对比研究

第二节 四物汤中藁本内酯合煎增溶配伍的研究

讨论

结论

参考文献

综述:中药单煎与合煎对比的研究进展

1 药对单-合煎对比研究

2 复方单煎与合煎对比研究

3 展望

综述参考文献

致谢

个人简历