大黄鞣质对脓毒症血小板减少症治疗的研究

摘要

目的：本课题旨在探究大黄鞣质(Rhubarb tannins)对肽聚糖(PGN)诱导健康人血小板凋亡及脓毒症相关血小板减少症患者的治疗作用。为探索和改善脓毒症相关血小板减少症提供治疗思路与证据。　　方法：30例健康成年人，清晨空腹取血30mL，梯度离心法提取洗涤血小板，将提取的洗涤血小板平均分成五组，第一组加入5uL无钙TB作为空白对照组（Control组），第二组用PGN孵育制造血小板凋亡模型（PGN组），使PGN在反应体系中终浓度为500ng/mL，后三组在用PGN孵育的基础上分别加入不同体积的大黄鞣质干预，使大黄鞣质在反应体系中的终浓度分别为25mg/L、50mg/L和100mg/L，低浓度大黄鞣质组(PGN+LR组）、中浓度大黄鞣质组(PGN+MR组)和高浓度大黄鞣质组(PGN+HR组）。各组室温下孵育30min后流式细胞术检测血小板线粒体膜电位（△Ψm)衰减和磷脂酰丝氨酸(PS)外翻情况。离心收集细胞，每组加入RIPA+PMSF(100:1)120uL冰上裂解细胞并间断涡旋。裂解后高速离心留取上清，各组加入5*SDS-PAGE上样缓冲液30uL混匀后95℃水浴10min。Western blot检测血小板半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Caspase-3活化后裂解片段、促凋亡蛋白Bak和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况。选取天津市第一中心医院ICU2014年3月至2015年12月收治的脓毒症血小板减少症患者，病例总数为40例。随机分为两组：西医组20例，采用常规综合西医治疗方法；中西医组20例，采用常规综合西医治疗+大黄鞣质鼻饲的中西医结合治疗方法。于纳入当天和疗程结束后分别进行疗效性指标观察：急性生理学慢性健康状况评分APACHEⅡ和中医证候积分。抽取静脉血检测外周血血小板计数（PLT)、C反应蛋白（CRP)和血清降钙素原(PCT)水平。分析治疗前后各指标的变化情况。　　结果：　　1.与Control组比较，PGN组线粒体(△Ψm)正常的血小板百分比显著下降; PS外翻的血小板百分比显著上升； Caspase-3活化后裂解片段表达增加； Bak表达增加； Bcl-2表达减少。与PGN组比较， PGN+MR组和PGN+HR组线粒体（ATm)正常的血小板百分比有所上升； PS外翻的血小板百分比有所下降； Caspase-3活化后裂解片段表达有减少； Bak表达亦有所减少；Bcl-2表达有所增加。即:加入大黄鞣质后减弱了由PGN诱导的血小板线粒体（△Ψm)的衰减、PS外翻、Caspase-3 活化后裂解片段和Bak的表达，增加了 Bcl-2的表达。并且大黄鞣质对PGN诱导血小板PS外翻和Caspase-3、Bak表达的抑制作用在50mg/L—100mg/L的浓度范围内呈现浓度依赖性。　　2.经过7天的治疗后，西医组和中西医组APACHEⅡ、中医证候积分、CRP、 PCT均较治疗前有所下降，且中西医组较西医组差异更为显著。 PLT水平较治疗前有所上升，中西医组上升较为明显。　　结论：　　1.大黄鞣质可以通过减弱PGN诱导的血小板线粒体（△Ψm)衰减、PS外翻、 Caspase-3活化后裂解片段表达、Bak表达，增强PGN诱导血小板Bcl-2表达来抑制PGN诱导的血小板凋亡，从而改善脓毒症相关血小板减少状态。　　2.大黄鞣质联合西医常规治疗的中西医结合治疗方法能有效改善脓毒症相关血小板减少症患者血小板减少的状态，并且可以降低炎症反应指标，改善脓毒症患者的预后。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分大黄鞣质对肽聚糖诱导人血小板凋亡的影响

实验1大黄鞣质对肽聚糖诱导人血小板线粒体△Ψm衰减和PS外翻的影响

1.对象与方法

2.结果

实验2大黄鞣质对PGN诱导血小板Caspase-3、Bak和Bcl-2表达的影响

1对象与方法

2结果

讨论

第二部分大黄録质对脓毒症血小板减少症的治疗作用

1对象与方法

1.1研究对象

1.2药物

2研究分组

3观察指标

4统计学处理

5 结果

5.1病例完成情况：

5.2 —般情况指标：

5.3疗效性观察指标:

5.4血小板计数和炎症反应指标

讨论

1.中医学中脓毒症的历史沿革

2.脓毒症的基本病机

3.脓毒症相关血小板减少症的的病机特点

4.大黄鞣质的潜能

5.大黄鞣质治疗脓毒症相关血小板减少症的作用机制

结论

参考文献

综述：血小板凋亡及天然药物调控研究进展

致谢

个人简历