复方中药注射剂血必净注射液通过免疫调节治疗脓毒血症的机理研究

摘要

脓毒血症主要是由已经明确的感染源或未明确的感染源造成的一种疾病，该病症主要表现为整个机体的系统性炎症反应。脓毒血症目前发生率和致死率都比较高，在该疾病中，研究发现，炎症反应有着很重要的作用，机体内促炎机制和抑炎机制表现紊乱，免疫调节机制中的平衡也被打破，不同类型和功能的T淋巴细胞之间的制约和平衡出现混乱，导致T淋巴细胞功能性失调，形成恶性循环，最终会导致死亡。尽管目前对于脓毒症的研究取得了阶段性的进展，减缓了死亡率，可是它依然是威胁人类健康的三大疾病之一。　　血必净注射液是目前已经广泛的应用于脓毒血症治疗中的中成药注射液，主要由红花、丹参、赤芍、川芎、当归五味中药成分组成。虽然目前有文献报道了血必净注射液可以抑制大量炎症因子的产生，但是关于血必净是如何通过调节T细胞之间的平衡来发挥保护作用，仍然不清楚。　　目前有大量的证据表明在脓毒血症中炎症反应是一个很关键的因素。我们已经知道初始CD4+T细胞经过不同的刺激会分化为不同的辅助T细胞，包括Treg、Th17、Th1和 Th2细胞。在正常机体内这四种细胞相互作用，维持平衡，共同保护机体。但是在脓毒血症中机体发生了紊乱，破坏了这种平衡。　　本实验主要是研究血必净注射液是如何通过调节Treg和Th17的平衡，来恢复免疫平衡达到治疗脓毒血症的效果。我们的实验通过盲肠结扎和穿刺的方法建立 C57小鼠的脓毒血症模型，分组的设置为：阴性对照组，假手术组，CLP模型组，地塞米松(DEX)组，血必净低剂量组，血必净中剂量组，血必净高剂量组。术后观察生存曲线，收集组织样本，通过生理切片HE染色方法观察病变情况，采集血清，用Elisa方法检测血清中炎症因子TNF-α和IL-6的含量变化，通过流式细胞法检测Th1、Th17和Treg细胞水平的变化以及和和这些T细胞有关的因子的变化。　　结果表明，血必净可以通过抑制促炎因子IL-17，IL-6和TNF-α的产生，促进抑炎因子IL-10的产生，增加Foxp3的表达量，促使nTreg和Th17细胞恢复平衡，达到保护机体的作用。图21幅，表3个，参考文献65篇。

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第一章 引言

第一节 脓毒血症的简介

1.1.1 脓毒血症的发展

1.1.2 脓毒血症的发病机制

1.1.3 脓毒血症的治疗措施

第二节 免疫系统T淋巴细胞简介

1.2.1 T淋巴细胞的功能和分类

1.2.2 Th1细胞和Th2细胞简介

1.2.3 Treg细胞简介

1.2.4 Th17细胞的简介

1.2.5 Treg细胞和Th17细胞相互作用机制

1.2.6 T细胞相关的不同因子的作用简介

第三节 血必净注射简介及应用

1.3.1 血必净注射液的主要成分及作用

第四节 本实验的研究内容、目的与意义

第二章 实验方法和材料

第一节 实验材料

2.1.1 动物

2.1.2 药物

2.1.3 试剂、实验器械及仪器

第二节 实验方法

2.2.1 动物分组

2.2.2 实验动物准备

2.2.3 CLP模型的建立

2.2.4 注射给药

2.2.5 观察指标

2.2.6 样本的采集以及处理方法

2.2.7 血清中因子的酶联免疫反应Elisa实验

2.2.8 T细胞的培养步骤

2.2.9 细胞染色

2.2.10Attune NXT声波聚焦流式细胞仪

2.2.11 数据分析

第三章 实验结果

第一节 血必净注射液提高了脓毒血症的存活率

第二节 血必净注射液减少炎症细胞的浸润

第三节 血必净促进Foxp3和IL-10的表达并抑制IL-17的表达

第四节 血清中TNF-α和IL-6的水平下降

第五节 体外细胞流式分析结果

第四章 结论

参考文献

致谢

个人简历 在学期间发表的学术论文及研究成果