林麝养殖场铜绿假单胞菌的分布调查及抗菌消毒药物的筛选

摘要

本研究从陕西省镇坪县逢春林麝养殖中心采集土壤、水、空气、动物体表、粪便和尿等样品52份，其中从土壤、卧台、粪便、鼻黏液、尿和伤口共6种样品中检出16份样品中含铜绿假单胞菌。通过对样品中细菌总数和铜绿假单胞菌数的分析，发现在粪便、伤口、土壤和鼻黏液中铜绿假单胞菌数最多，平均含菌量在106-1010CFU/g或mL之间。　　对分离菌株运用常规细菌学和16SrRNA方法进行鉴定，发现来自粪便、尿、土壤、卧台和鼻黏液的14株分离菌为革兰氏阴性短杆菌，产生水溶性绿色色素，来自伤口的2株分离菌为革兰氏阴性中长杆菌，不产生水溶性绿色色素，16株菌主要细菌生化试验结果与文献报道的一致，16株菌的16SrRNA目标片段测序结果与标准株的同源性在99％以上。因此，最终确定这16株细菌为铜绿假单胞菌，编号为PAsp-4至PAsp-19。小鼠毒力试验(LD50)显示，来源动物体（伤口、粪便、鼻黏液和尿液）的菌株毒力远远大于从养殖场环境（土壤和卧台）分离的菌株，前者的LD50约为106CFU，后者为108-109 CFU之间。　　药敏纸片试验结果显示，分离的16株铜绿假单胞菌均对环丙沙星、氧氟沙星、丁胺卡那、阿洛西林、头孢砒亏和亚胺培南敏感;对头孢哌酮、庆大霉素、链霉素和多粘霉素B中度敏感;对羧苄青霉素、头孢唑啉、氨苄西林、红霉素、四环素、复方新诺明、头孢呋辛和氟苯尼考不敏感。比较养殖场使用的7种抗生素（环丙沙星、庆大霉素、四环素、链霉素、羧苄西林、氟苯尼考和复方新诺明）的MIC值后发现，环丙沙星MIC值最小，为0.15625-0.625μg/mL，庆大霉素为2.5-10μg/mL，链霉素为20-160μg/mL，氟苯尼考为160-640μg/mL，四环素为64-512μg/mL，羧苄西林为160-1280μg/mL，复方新诺明在溶解度达到饱和时仍没有抑菌作用。因此，环丙沙星是治疗该场铜绿假单胞菌感染的首选药物。　　按照GB15981-1995规定的消毒剂消毒效果评价与标准，对养麝场使用的过氧乙酸、次氯酸钠、碘伏和苯扎溴铵4种消毒剂的消毒效果进行评价，发现5％过氧乙酸的消毒效果最好，作用10min后，对1.5×104CF U/ml新鲜菌液杀菌率达到100％。

目录

声明

摘要

1．前言

1．1 林麝简介

1．2 人工养麝的现状

1．3 林麝养殖场简介

1．4 铜绿假单胞菌简介

1．4．1 病原学

1．4．2 流行病学

1．4．3 临床症状

1．4．4 致病机理

1．5 铜绿假单胞菌耐药机制的研究

1．5．1 蛋白质水平的耐药机制

1．5．2 基因水平产生的耐药机制

1．6 消毒剂的研究

1．6．1 消毒剂的作用机理

1．6．2 影响消毒剂效果的因素

1．6．3 细菌对消毒剂的耐药性

1．7 本研究的目的和意义

2．试验材料

2．1 试验样品

2．2 试验仪器

2．3 主要培养基

2．4 主要试剂和药品

2．5 试验动物

3．试验方法

3．1 林麝养殖场铜绿假单胞菌分布调查

3．1．1 样品采集

3．1．2 样品处理

3．1．2 样品中细菌总数和铜绿假单胞菌数的计算

3．2 铜绿假单胞菌的分离鉴定

3．2．1 常规细菌学鉴定

3．2．2 16SrRNA鉴定

3．2．3 铜绿假单胞菌的LD50

3．3 抗生素筛选试验

3．3．1 药敏试验

3．3．2 几种抗生素的MIC值测定

3．4 消毒剂筛选试验

4．试验结果

4．1 林麝养殖场铜绿假单胞菌分布调查

4．2 铜绿假单胞菌的分离鉴定

4．2．1 分离细菌的形态、染色及菌落形态

4．2．2 培养特性观察

4．2．3 生理生化特性观察

4．2．4 16SrRNA鉴定

4．2．5 铜绿假单胞菌的LD50

4．3 抗生素筛选试验

4．3．1 药敏试验

4．3．2 几种抗生素的MIC值测定

4．4 消毒剂筛选试验

5．分析讨论

5．1 林麝养殖场细菌分布调查

5．2 铜绿假单胞菌的分离鉴定

5．3 抗生素的筛选

5．4 消毒剂的筛选

6．结论

7．创新性

参考文献

致谢

附图