黄芪提取物对Aβ诱导大鼠海马神经元损伤保护作用及其机理的研究

摘要

目的：探讨EA对AB诱导大鼠海马神经元损伤保护作用及其可能机制。 方法：1 采用侧脑室注射Aβ<,25-35>的方法建立大鼠早老性痴呆模型，运用Moms水迷宫方法观察EA对早老性痴呆模型大鼠学习记忆能力的影响；利用病理组织学检查，观察EA对早老性痴呆模型大鼠脑组织病理性损伤的保护；运用免疫组化的方法，检测EA对其Bcl-2和Bcl-x1表达的影响。2采用胎鼠海马神经元体外培养法，观察EA对Aβ<,25-35>诱导海马神经元损伤的保护作用。采用检测神经元LDH漏出率、MTT法测细胞的活力；运用LSCM检测胞浆钙离子浓度变化；采用RT-PCR法检测P53 mRNA的表达及Westem blotting检测核因子NF-кBP65核含量的表达；利用TUNEL法检测细胞凋亡，探讨Aβ<,25-35>诱导神经细胞损伤及EA保护作用的可能机制。 结果如下： 1侧脑室注射Aβ<,25-35>可诱导大鼠早老性痴呆模型，损伤大鼠的学习记忆能力。EA40、80mg/kg可使大鼠的逃避潜伏期降低、游泳距离缩短，学习记忆能力改善，表明EA对Aβ<,25-35>引起大鼠的学习记忆能力损伤有保护作用。 2 EA 20、40、80mg/kg能改善Aβ<,25-35>引起大鼠脑组织损伤的病理组织学变化。HE染色中，EA能使损伤的脑组织中炎性细胞数及空泡细胞百分率降低。 3 EA能增强脑组织抗细胞凋亡的能力，降低神经细胞凋亡率。同时EA20、40、80mg/kg可使大鼠脑组织Bcl-2及Bcl-x1表达增加。 4 Aβ<,25-35>可诱导海马神经元胞浆钙离子浓度升高。EA 20μg·ml<'-1>能使升高的胞浆钙离子水平降低。 5 在体外Aβ<,25-35>亦可直接引起神经元损伤。EA 20、40μg·ml<'-1>对体外Aβ<,25-35>引起胎鼠海马神经元的损伤有保护作用，提高神经细胞的活力。 6 Aβ<,25-35>可诱导海马神经细胞表达P53 mRNA的表达增加。加入EA 20μg·ml<'-1>后18小时行RT-PCR，电泳结果显示P53 mRNA条带面积及灰度均降低，积分光密度下降。表明EA可以使Aβ<,25-35>诱导海马神经细胞增加P53 mRNA的表达减少。 7 Aβ<,25-35>可使海马神经细胞核转录因子NF-кBP65的核含量增多。EA20 μg·ml<'-1>使NF-кBP65的核含量显著增加。加入Aβ<,25-35>后18小时提取核蛋白行Westemblotting，结果显示NF-кB P65条带面积及灰度均升高，积分光密度上升。 8 Aβ<,25-35>可引起海马神经元发生凋亡。EA 20μg·ml<'-1>能显著降低神经元中凋亡的细胞百分率。TUNEL法检测凋亡阳性细胞数减少、细胞凋亡指数下降。 结论：EA对Aβ<,25-35>引起的海马神经元损伤有保护作用，其机制可能与抗细胞凋亡、降低胞浆钙离子浓度、减少P53 mRNA表达、升高核蛋白NF-кBP65的核含量作用有关。

目录

论文说明：英文缩略词表(abbreviation)

声明

1前言

2实验材料

3实验方法

4实验结果

4.1 EA对AD模型大鼠学习记忆能力的影响

4.2 EA对AD模型大鼠海马病理组织学的影响

4.3 EA对AD模型大鼠海马神经元中Bcl-2与Bcl-xl蛋白表达的影响

4.4 EA对钙离子的影响

4.5 EA对Aβ25-35所致胎鼠海马神经元损伤形态学影响

4.6 EA对胎鼠海马神经元活力的影响

4.7 EA对海马神经元中p53mRNA表达的影响

4.8 EA对核因子NF-к Bp65的影响

4.9 EA对海马神经元凋亡细胞数的影响

5讨论

6结论

参考文献

附录

致谢

综述:β淀粉样蛋白在海马神经元损作中的作用