猪囊尾蚴重组抗原用于囊尾蚴病的血清学诊断

摘要

目的：从猪囊尾蚴中扩增出目的基因cCl，克隆并表达。利用所得的重组蛋白，建立一种新的囊尾蚴病的血清学诊断方法。 方法：特定寡核苷酸引物的设计和合成，Trizol试剂提取猪囊尾蚴RNA，RT-PCR法扩增cCl基因编码序列，将扩增产物连接pGEM-T克隆载体，再亚克隆到原核表达载体pET28a中。将获得的pET28a-cCl阳性重组子转化宿主菌E．coli BL21，IPTG诱导表达，Western blotting鉴定。以表达纯化的重组蛋白cCl为包被抗原，利用ELISA法检测囊尾蚴病患者血清和正常人血清。 结果：RT-PCR法特异性扩增出cCl编码基因片段，将重组质粒pGEM-T-cCl，pET28a-cCl分别作BamH I和Xho I双酶切，均能得到一个大小与PCR扩增产物一致的插入片断，对插入片断的测序结果表明，cCl具有一个长度为1044bp的完整开放阅读框(ORF)，理论分子量38kDa，与GenBank收录(编号为AFl47955)的猪囊尾蚴cCl基因完全一致。重组质粒在BL21中高效表达，SDS-PAGE显示表达蛋白的分子量约为40kDa，与预期值一致，以囊尾蚴病患者血清进行Westernblotting 分析，特异性条带出现于预期值处。以重组蛋白为包被抗原检测囊尾蚴病患者血清，具有高度的敏感性和特异性。 结论：成功克隆、表达了猪囊尾蚴抗原基因cCl，并初步发现其作为诊断抗原诊断囊尾蚴病具有高度的敏感性和特异性，为进一步开展其在囊尾蚴病血清学诊断的研究奠定了基础。

目录

论文说明：英文缩略词表

声明

摘要

1前言

2材料与方法

3结果

4讨论

5结论

6参考文献

附录

致谢

综述 囊尾蚴功能抗原的研究进展