体外诱导成人外周血单个核细胞向血管内皮细胞分化

摘要

目的： 应用血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子在体外联合诱导人外周血单个核细胞(PBMNCs)定向分化为血管内皮细胞，为外周血干细胞在组织工程血管化及肢体缺血性疾病的细胞移植治疗中的应用提供理论依据。 方法： (1) 无菌条件下，取重组人粒细胞集落刺激因子刺激后采集的 PBMNCs 2ml，分别设立实验组1和对照组；健康人外周血20mL，作为实验组2。肝素抗凝。 (2) Hanks液双倍稀释，按1：2置于淋巴细胞分离液上层，离心后提取分液层与上层交界部位呈混浊的灰白色层，即为单个核细胞层。 (3) 取离心后的细胞，向DMEM-F12培养基中分别加入含体积分数为0.2的胎牛血清、10μg/L血管内皮细胞生长因子、10μg/L碱性成纤维细胞生长因子。对照组中不加血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子等诱导剂。吹打均匀并计数，按1×10<'10>L<'-1>接种于25cm<'2>培养瓶中，于37℃、体积分数为0.05的CO<,2>饱和湿度培养箱中培养，第3天更换培养基，去除未贴壁的细胞，以后每2d换液一次。 (4) 倒置相差显微镜下观察细胞单层排列是否呈“铺路石”样结构。运用流式细胞术检测诱导后的细胞表达CD31和vwF情况。透射电镜观察细胞的超微结构。 结果： (1) 诱导分化后细胞形态学变化：经血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子诱导后的细胞形态上呈典型的“铺路石”样外观，经历从小圆→梭形→扁平细胞的过程，符合内皮前体细胞演变为成熟内皮细胞的过程。 (2) 诱导分化后细胞的表面标志鉴定：诱导分化20d，贴壁细胞中62.5％表达CD31，58.2％表达vWF，54.3％表达CD31/vWF。 (3) 培养细胞的超微结构观察：透射电镜下细胞胞浆内可见特征性W-P小体。 结论： 外周血单个核细胞在血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子联合诱导下，可分化为血管内皮细胞。

目录

论文说明：中英文名词对照表

声明

前言

1材料与方法

2结果

讨论

结论

进一步研究方向

参考文献

附录

致谢

课题综述 内皮祖细胞与出生后血管新生

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