有丝分裂器蛋白CENP-F、NuMA在人脑胶质瘤中的表达研究

摘要

目的：着丝粒蛋白CENP-F(centromere protein F，CENP-F)和核有丝分裂器蛋白NuMA是两个重要的有丝分裂器(mitotic印paratus，MA)蛋白。国外众多资料研究表明它们与人类肿瘤细胞的恶性增殖相关。但有关两者与人脑胶质瘤恶性增殖的相关性报道国内外均少见。我们前期的研究发现CENP-F蛋白在人脑胶质瘤和正常脑组织中存在着差异表达，本文旨在从蛋白质和基因两个水平上进一步研究CENP-F、NuMA在人脑胶质瘤中的表达，探讨它们与人脑胶质瘤恶性增殖和预后的关系。 方法： (1)调取安徽医科大学第一附属医院病理科2001年1月至2004年12月之间存档的胶质瘤石蜡标本70例，经病理学检查确诊为原发性胶质瘤(其中58例为原发性脑星形细胞肿瘤)作为实验组。同时从安徽医科大学第一附属医院病历档案室收集整理其临床资料。另取24例正常脑组织(取自颅脑外伤手术切除的非肿瘤组织)，同样经HE染色证实为非肿瘤脑组织作为正常对照组。用免疫组织化学(IHC)方法检测人脑胶质瘤和非肿瘤脑组织中PCNA、Ki-67、CENP-F和NuMA的表达，观察它们在不同病理分级的胶质瘤以及非肿瘤脑组织中的表达： (2)收集安徽医科大学第一附属医院神经外科手术切除的新鲜胶质瘤标本10例，经病理检查确诊为原发性胶质瘤作为实验组；另取颅脑外伤手术切除的非肿瘤脑组织新鲜标本5例，经HE染色证实为非肿瘤脑组织作为正常对照组；应用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction，RT-PCR)技术检测新鲜胶质瘤标本和非肿瘤脑组织中 CENP-F mRNA的表达，以β-actin作为内对照检测RNA； (3)对诊断为原发性脑星形细胞肿瘤中的40例患者进行电话或信件随访。 (4)收集安徽医科大学第一附属医院神经外科手术切除的新鲜胶质瘤标本4例(包括肿瘤组织、瘤旁组织和瘤旁正常组织)，经病理检查确诊为原发性胶质瘤。应用免疫印迹技术(westem blotting)检测NuMA在同一胶质瘤患者的肿瘤组织、瘤旁组织和瘤旁正常组织中的表达。 结果： (1)70 例脑胶质瘤标本中，PCNA、Ki-67和CENP-F的增殖标记指数(Proliferation Labeling Index，PLI)分别为44.02％±29.37％、17.01％±17.68％和36.80％±27.23％；对照组24例非肿瘤脑组织中Ki-67不表达，PCNA和CENP-FPLI为12.11％±19.81％和9.06％±8.27％；两组比较具有显著差异(P<0.05)； (2)PCNA、Ki-67、CENP-F的表达与胶质瘤患者的年龄、性别无关，与病理分级和组织学分型相关(P<0.05)； (3)CENP-F mRNA在非肿瘤脑组织中弱表达(0.351±0.492)，胶质瘤中的表达明显增高(1.016±0.544)，两者比较具有统计学意义(P<0.05)，相关分析显示CENP-F、mRNA与Ki-67标记指数亦呈正相关(r=0.801，P<0.05)； (4)脑星形细胞肿瘤中CENP-F、Ki-67蛋白的表达在低级别组和高级别组之间存在显著差异，高级别组要显著高于低级别组(P<0.05)；随访40例，其中失访2例，对随访结果进行COX比例风险模型单因素分析和多因素分析显示，CENP-F蛋白的表达、肿瘤的恶性程度和患者的生存期密切相关(P<0.05)。 (5)免疫组化结果显示NuMA在Ⅰ级+Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级人脑胶质瘤中的表达分别为42.4％、74.1％、70.0％；在正常脑组织中NuMA的表达率为29.2％。其差异具有统计学意义(P<0.01)。NuMA蛋白在人脑胶质瘤中的表达与胶质瘤的病理分级显著正相关(P<0.05)，但与胶质瘤的组织学类型无关(P>0.05)。 (6)western blotting检测发现胶质瘤肿瘤组织中NuMA蛋白的表达量明显高于瘤旁组织，瘤旁正常脑组织中未见表达。 结论： (1)有丝分裂器蛋白CENP-F和NuMA过表达和胶质瘤的增殖活性增高密切相关，很可能对肿瘤细胞的增殖和恶性转化产生重要的推动作用； (2)人脑胶质瘤中PCNA、Ki-67和CENP-F的PLI与胶质瘤的病理分级和病理分型密切相关，均可能作为判断胶质瘤恶性程度的重要指标； (3)人脑星形细胞肿瘤中CENP-F、Ki-67蛋白的表达与其恶性程度密切相关，肿瘤的病理分级即恶性程度越高，CENP-F、Ki-67 PLI也越高；CENP-F、Ki-67蛋白的表达和肿瘤的恶性度可作为考察脑星形细胞肿瘤预后的重要指标。

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摘要

1.引言

2.材料与方法

3.结果

4.讨论

5.结论

参考文献

附图

附 录

致 谢

综 述　人类染色体动粒蛋白研究进展