中年昆明小鼠学习记忆功能、血清甲状腺素水平与相关脑区Synaptotagmin Ⅰ和Rab3a蛋白含量相关性研究

摘要

目的：研究中年昆明小鼠学习记忆功能、血清甲状腺素水平与相关脑区Synaptotagmin I和Rab3a蛋白含量，及其相互之间相关性研究。 方法：选取5月龄组和12月龄组昆明小鼠：5月龄组27只(13雄14雌)，12月龄组12只(4雄8雌)。通过新物体再认和六臂放射状水迷宫(radial six-armwatermaze,RAWM)实验观察小鼠的学习记忆能力。行为学实验结束后两周采血取脑，应用放射免疫法检测小鼠血清甲状腺素(thyroid hormone，TH)水平，采用蛋白质印迹技术(Western blotting)检测两组小鼠嗅球、额叶、顶叶、腹侧海马及背侧海马中Synaptotagmin I(Syt I)、Rab3a和内参蛋白β.actin蛋白的表达，然后经Photoshop CS软件处理后，再用图像分析系统(Inage-Pro Plus 6.0)进行印迹条带灰度值测定。Syt I(Rab3a)灰度值与β-actin灰度值的比值作为Syt I(Rab3a)相对含量。用方差分析方法进行统计学分析，使用Spearman秩相关检测行为学实验参数、血清TH和Syt I(Rab3a)相对含量三者之间的相关性。 结果： ①新物体再认实验中5月龄组和12月龄组小鼠无论在训练期还是实验期，探索总时间和优先指数均无统计学差别； ②RAWM实验示：学习期中随着实验天数的增加，两组小鼠均表现出错误数逐渐减少，潜伏时间逐渐缩短。12月龄组与5月龄组小鼠相比较显示出错误数多，潜伏时间长，重复测量方差分析显示有显著性，分别为[F(1,37)=5.36l，P=0.026]和[F(1,37)=6.948，P=0.012]。记忆期时两组小鼠在试验中错误数随天数的增加而下降，潜伏时间也随天数的增加而缩短。12月龄组小鼠错误数多[F(1，37)=12.298，P=0.001]，潜伏时间长[F(1，37)=13.900，P=0.001]； ③12月龄组小鼠血清TT3和TT4水平明显低于5月龄组，P分别为0.001和0.022; ④Westernblotting检测两组昆明小鼠嗅球、顶叶、额叶、背侧海马和腹侧海马中突触蛋白Syt I和Rab3a的相对含量无显著差异； ⑤新物体再认实验中，TT3和TT4与实验成绩之间未表现出相关性。RAWM实验中，TT4与学习期潜伏时间，记忆期错误数和潜伏时间存在负相关(r=-0.348，P=0.03、r=-0.503，P=0.001和r=-0.503，P=0.001)，而TT3仅与记忆期潜伏时间有负相关(r=-0.38，P=0.017)； ⑥TT3与五个脑区中突触蛋白Syt I和Rab3a表达未见明显相关，TT4仅在嗅球与Rab3a正相关(r=0.345，P=0.032)，在腹侧海马中与Rab3a负相关(r=-0.401，P=0.013)，与五个脑区中突触蛋白Syt I无相关，与顶叶、额叶和背侧海马中Rab3a表达无相关。 结论： ①12月龄昆明小鼠空间学习记忆功能下降明显，而非空间学习记忆未出现改变。 ②12月龄组小鼠血清TT3和TT4水平均低于5月龄组。 ③对不同脑区突触蛋白Syt I和Rab3a的检测未见年龄相关性改变。 ④TT4与学习期潜伏时间，记忆期错误数和潜伏时间存在负相关，TT3与记忆期潜伏时间有负相关。 ⑤TH与五个脑区中突触蛋白Syt I和Rab3a表达未见明显相关。

目录

论文说明:中英文缩略语表

声明

1.引言

2.材料和方法

2.1材料

2.2行为学测试

2.3血清甲状腺素检测

2.4脑标本采集

2.5 Western blotting步骤

2.6统计学处理

3.结果

3.1行为学检测结果

3.2血清TH水平

3.3蛋白定量

3.4血清甲状腺素与行为学和突触蛋白(Syt Ⅰ、Rab3a)相关性分析

4讨论

4.1中年昆明小鼠，存在非同步性空间和非空间学习记忆功能损害

4.2中年小鼠血清TH水平降低

4.3不同脑区年龄相关性突触蛋白Syt Ⅰ、Rab3 a相对含量

4.4血清甲状腺素与行为学和突触蛋白(Syt Ⅰ、Rab3a)相关性

5.结论

参考文献

附录:个人简历

致谢

综述:甲状腺素与脑认知