复方黄连胶囊对早期糖尿病肾病大鼠肾病变的防治作用研究

摘要

目的：研究复方黄连胶囊对早期糖尿病肾病大鼠。肾病变的防治作用。 方法： 1.1药物制备和含量测定1.1黄连中盐酸小檗碱提取：黄连粗品采用6倍量80％乙醇为溶剂，乙醇中加入0.25％硫酸，提取3次，每次90 min。 1.2葛根、枇杷叶、麦冬混合提取：葛根、枇杷叶、麦冬粗品采用8倍量60％乙醇为溶剂，提取3次，每次60min。 1.3采用HPLC测定CRCC中盐酸小檗碱的含量：选用C18柱(250mmx4.6mm，5μm)；检测波长263nm；流动相：0.033mol/LKH2PO4-乙腈(48:52)；流速：1.0mL/min：柱温：25℃，进样量为20μL)； 1.4采用HPLC测定CRCC中葛根素的含量：选用C18柱(250mm×4.6mm，5μ)；检测波长250nm；流动相：甲醇-水(26:74)；流速：1.0mL/min：柱温：30℃，进样量为10μL)； 2.DN大鼠模型建立、分组及给药：采用文献方法，选取健康Wistar雄性大鼠，体重为180～220g。禁食不禁水12h后，腹腔一次性无菌注射链脲佐菌素(STZ)60mg/kg， 72h后眼眶取血测空腹血糖(FBG)，选取血糖值≥11.1mmol/L，尿糖++～+++72只纳入实验。 符合条件动物随机均分为6组：模型组、CRCC高剂量组(4.36g/kg，相当于临床人用等效量4倍)、低剂量组(2.18 g/kg，相当于临床人用等效量2倍)、消渴丸组(0.80g/kg相当于临床人用等效量2倍)、盐酸小檗碱+葛根素组(盐酸小檗碱精制品200 mg/kg+葛根素150 mg/kg)、依那普利组(10mg/kg)，另设正常对照组8只。 除模型组及正常对照组给予0.5％CMC-Na，其余各用药组均采用灌胃给药，一天一次，连续给药8w。 3.指标检测：生化分析：FBG、BUN、Scr；放免分析：Ins、C-P、TNF-α、α1-MG、β2-MG；光镜观察：肾小球HE染色；电镜观察：肾脏超微结构；免疫组化检测：肾皮质Bcl-2、Bax、VEGF蛋白表达；RT-PCR检测：肾皮质Bcl-2、Bax、VEGF mRNA表达；其他：体重、肾重、一般状态。 结果：模型组大鼠FBG、Scr、BUN、TNF-α、α1-MG、β2-MG水平显著升高，体重、Ins和C-P水平显著降低，光镜下可观察到模型组大鼠的肾小球细胞出现空泡样变，细胞外基质增多，毛细血管攀数量减少，肾小管肿胀。电镜下进一步观察到肾小球细胞基底膜增厚，足突融合，胞内线粒体出现退化性变，染色质出现边集现象。肾皮质Bcl-2蛋白和mRNA的表达降低，Bax、VEGF蛋白和mRNA的表达升高。上述结果提示，本实验成功制备了大鼠糖尿病肾病早期模型。与模型组比较，CRCC及其他各给药组能显著降低大鼠FBG、Scr、BUN、TNF-α、α1-MG、β2-MG水平，升高体重、Ins和C-P水平。光镜下观察，大鼠的肾小球细胞空泡样变程度减轻，细胞外基质堆积减少，开放的毛细血管数量增多，肾小管轻微肿胀。电镜下进一步观察到肾小球细胞基底膜增厚和足突融合程度减轻，线粒体轻度肿胀。肾皮质Bcl-2蛋白和mRNA的表达升高， Bax、VEGF蛋白和mRNA的表达降低。 结论： 1.CRCC(2.18、4.36g/kg)，盐酸小檗碱精制品200 mg/kg+葛根素150 mg/kg，消渴丸(0.80g/kg)能够降低DN大鼠的FBG、升高Ins、C-P。 2.CRCC(2.18、4.36/kg)，盐酸小檗碱精制品200 mg/kg+葛根素150 mg/kg，消渴丸(0.80g/kg)，依那普利(10mg/kg)能够降低DN大鼠Scr、BUN、α1-MG、β2-MG和肾重体重比值水平，改善肾功能。 3.病理观察提示CRCC(2.18、4.36g/kg)，盐酸小檗碱精制品200 mg/kg+葛根素150 mg/kg，消渴丸(0.80g/kg)，依那普利(10mg/kg)能够不同程度的促进DN大鼠肾小球结构逐步恢复和改善，保护肾脏超微结构。 4.RT-PCR结果提示CRCC(2.18、4.36g/kg)，盐酸小檗碱精制品200 mg/kg+葛根素150 mg/kg，消渴丸(0.80g/kg)，依那普利(10mg/kg)能够不同程度抑制肾皮质Bax、VEGF蛋白和mRNA表达，促进Bcl-2蛋白和mRNA表达。 以上实验结果综合表明，CRCC对早期DN具有防治作用，能够延缓DN进程。

目录

论文说明：英文缩略词表

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摘要

实验一复方黄连胶囊制备及含量测定

1.前言

2.材料

3.药物制备

4.含量测定

5.结论

实验二复方黄连胶囊对早期糖尿病肾病大鼠肾病变的防治作用研究

1.前言

2.材料

3.实验方法

4.数据处理

5.结果

6.讨论

7.小结

参考文献

致谢

附录

综述：中药治疗糖尿病肾病的研究