雷帕霉素和雷洛昔芬对蛋白尿慢性肾纤维化大鼠肾脏保护作用

摘要

背景与目的:肾纤维化是各种原因所致慢性肾脏疾病(Chronic kidney disease，CKD)走向终末期肾脏病(End stage renal diseases，ESDR)的共同途径，其以Ⅰ、Ⅳ型胶原以及纤维连接蛋白等细胞外基质成份的集聚为特点。近年研究表明肌成纤维细胞在肾纤维化中发挥重要作用，抑制肌成纤维细胞活化、增殖、转分化可有延缓肾纤维化进展。雷帕霉素(Rapamycin，RPM)是一种新型、强效免疫抑制剂，具有很强的抗炎、抗病毒、抗细胞增殖以及血管保护作用，已有研究表明RPM对局灶节段性肾小球硬化症有明显的保护作用。雷洛昔芬(Raloxifene，RLX)为选择性雌激素受体调节剂，有研究证实RLX可以减少糖尿病肾病尿蛋白排出量、抑制系膜细胞增殖和减少ECM的沉积。本研究通过检测多柔比星蛋白尿慢性肾纤维化大鼠肾组织中α-SMA表达的动态变化来探索肾纤维化过程中肾脏内肌成纤维细胞的动态变化及其在蛋白尿和肾纤维化发展过程中的作用。同时观察前述两种药物对蛋白尿慢性肾纤维化大鼠动物模型的肾脏保护作用及其对肌成纤维细胞的影响，进一步探讨其可能机制。
　　 方法:通过重复给予大鼠尾静脉注射多柔比星制备蛋白尿慢性肾纤维化大鼠模型。雄性SD大鼠96只随机分为：正常组(A组，n=24)，模型组(B组，n=24)，RPM给药组(C组，n=16)，RLX给药组(D组，n=32)。首次注射多柔比星后第2周末起分别给予C组、D组大鼠RPM 1.5㎎·㎏﹣1、RLX 3.0㎎·㎏﹣1，每日灌胃给药。于4、7、10、13 wk末收集A、B、D组标本，7wk末收集C组标本。检测24 h 尿蛋白排泄率、应用HE、PAS、Masson染色观察肾脏病理改变，免疫组化检测α-SMA、FN蛋白的表达。
　　 结果:①各组大鼠24 h尿蛋白排泄率变化4、7、10、13 wk末B、D组及7 wk末C组大鼠24 h 尿蛋白明显高于同时间点A组(P＜0.01)，且随病程逐渐升高，C，D组低于同时间点B组(P＜0.01)。②各组大鼠肾脏病理形态学变化光镜示B组大鼠于7 wk末开始肾小球硬化呈局灶节段性分布，肾小球肥大、间质可见局灶性炎细胞。随着病程进展，纤维化程度和面积加重。13 wk末出现广泛的肾小球硬化和小管间质纤维化。与同时间点B组相比较，10 wk末时D组小管间质炎症、肾小球的硬化和小管间质纤维化均有明显减轻,TII评分差异有统计学意义(P＜0.05)。③各组大鼠肾组织α-SMA、FN蛋白表达变化免疫组化半定量结果显示，4 wk末B组α-SMA蛋白表达较A组增多，后随病程延长，逐渐增高(P＜0.05)。C组和D组α-SMA蛋白表达均较同时间点B组降低(P＜0.05)。FN蛋白表达具有相同的变化趋势(P＜0.05)。
　　 结论:在多柔比星慢性肾纤维化大鼠模型中，随着病程的进展，肾组织内肌成纤维细胞逐渐增多，伴有FN的增多。RPM和RLX抑制大鼠肾脏中肌成纤维细胞的活化和转分化，并抑制FN合成。其肾脏保护作用可能与抑制蛋白尿，抑制肌成纤维细胞的转分化及合成细胞外基质有关。